| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-32页 |
| ·甜味蛋白研究进展 | 第18-23页 |
| ·高效甜蛋白研究概况 | 第18-19页 |
| ·甜味蛋白的种类 | 第19-22页 |
| ·MONELLIN甜味蛋白研究进展及应用 | 第22-23页 |
| ·基因工程技术在甜味蛋白研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·几种表达系统在甜味蛋白研究中的应用 | 第23页 |
| ·毕赤酵母表达系统的应用 | 第23-24页 |
| ·基因工程在植物育种中的应用 | 第24-28页 |
| ·基因工程育种概述 | 第24-25页 |
| ·植物转基因研究方法概述 | 第25-27页 |
| ·转基因植物检测技术 | 第27页 |
| ·基因工程育种在理论和实践上的突破 | 第27-28页 |
| ·转基因产品的安全检查 | 第28页 |
| ·桑树转基因研究进展 | 第28-32页 |
| ·转基因技术在桑树育种中的应用 | 第29页 |
| ·桑树组织培养技术研究概况 | 第29-30页 |
| ·桑树转基因的前景 | 第30-32页 |
| 第二章 引言 | 第32-36页 |
| ·研究背景 | 第32页 |
| ·桑树的多元化发展 | 第32页 |
| ·植物甜味蛋白MONELLIN的相关研究 | 第32页 |
| ·研究目的及意义 | 第32-34页 |
| ·甜味蛋白替代某些食品添加剂 | 第32-33页 |
| ·甜味蛋白MONELLIN在桑树遗传转化中的应用 | 第33-34页 |
| ·研究内容 | 第34-35页 |
| ·MONELLIN基因的人工设计与合成 | 第34页 |
| ·高效真核表达载体的构建 | 第34页 |
| ·甜味蛋白MONELLIN在毕赤酵母中的分泌表达 | 第34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·甜味蛋白MONELLIN在桑树中的遗传转化 | 第35页 |
| ·研究的技术路线 | 第35-36页 |
| 第三章 甜味蛋白MONELLIN基因密码子优化合成 | 第36-44页 |
| ·材料和方法 | 第36-37页 |
| ·Monellin甜蛋白氨基酸序列的分析 | 第36页 |
| ·桑树与毕赤酵母密码子的偏爱性 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·Monellin甜蛋白氨基酸序列的分析 | 第37-38页 |
| ·基因密码子的使用频率 | 第38-40页 |
| ·monellin基因密码子优化与合成 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| ·密码子优化的必要性 | 第41-42页 |
| ·甜味蛋白Monellin基因密码子的优化 | 第42页 |
| ·甜味蛋白Monellin基因的合成 | 第42-44页 |
| 第四章 甜味蛋白MONELLIN基因在毕赤酵母中的表达分析 | 第44-68页 |
| ·材料和试剂 | 第44-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第45页 |
| ·主要培养基 | 第45-46页 |
| ·主要溶液与配制 | 第46-49页 |
| ·实验方法 | 第49-61页 |
| ·monellin基因和EGFP基因的克隆 | 第49-52页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·重组质粒转化酵母感受态细胞 | 第54-55页 |
| ·筛选稳定表达的毕赤酵母重组子 | 第55-56页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·诱导表达上清液的SDS-PAGE电泳 | 第57-58页 |
| ·表达产物的纯化 | 第58-59页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第59-61页 |
| ·表达的目的蛋白甜味鉴定 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-67页 |
| ·monellin基因与EGFP基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·真核表达载体pPIC9K-M及pPIC9K-M-E的构建 | 第62-63页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第63页 |
| ·蛋白的诱导表达、纯化与鉴定 | 第63-66页 |
| ·表达蛋白部分性质的初探 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| ·目的蛋白的纯化与鉴定 | 第67页 |
| ·Monellin甜味蛋白部分性质的初探 | 第67-68页 |
| 第五章 甜味蛋白MONELLIN基因对桑树的遗传转化 | 第68-94页 |
| ·材料和试剂 | 第68-72页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第68页 |
| ·主要试剂和药品 | 第68-69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·主要培养基 | 第69-70页 |
| ·主要溶液的配制 | 第70-72页 |
| ·实验方法 | 第72-80页 |
| ·桑树组织培养中培养基的配制 | 第72-73页 |
| ·桑树遗传转化中外植体的获得 | 第73-75页 |
| ·桑树遗传转化载体的构建 | 第75-77页 |
| ·表达质粒pCAMBIA2301-M转化农杆菌 | 第77-78页 |
| ·农杆菌介导的桑树遗传转化 | 第78-79页 |
| ·花粉介导的桑树遗传转化 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-91页 |
| ·不同培养方式对桑种萌发的影响 | 第80-84页 |
| ·不同外植体获得桑树丛生芽 | 第84-85页 |
| ·桑树遗传转化载体pCAMBIA2301-M的构建 | 第85页 |
| ·表达质粒pCAMBIA2301-M转化农杆菌 | 第85-86页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第86-90页 |
| ·花粉介导的遗传转化 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-94页 |
| ·不同培养方式对桑种萌发的影响 | 第91-92页 |
| ·桑树丛生芽的获得 | 第92页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化研究 | 第92-93页 |
| ·花粉介导的遗传转化研究 | 第93-94页 |
| 第六章 桑树转基因株系的分子生物学鉴定 | 第94-116页 |
| ·材料和试剂 | 第94-97页 |
| ·植物材料 | 第94页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第94页 |
| ·主要试剂 | 第94-95页 |
| ·主要仪器 | 第95页 |
| ·主要溶液与配制 | 第95-97页 |
| ·实验方法 | 第97-103页 |
| ·CTAB法提取桑嫩叶的基因组DNA | 第97-98页 |
| ·PCR | 第98-99页 |
| ·相对荧光定量PCR(Relative quantitative RT-PCR) | 第99-101页 |
| ·斑点杂交 | 第101-102页 |
| ·组织化学染色(GUS基因检测) | 第102-103页 |
| ·结果与分析 | 第103-111页 |
| ·转基因株系的PCR检测 | 第103-106页 |
| ·转基因株系的相对荧光定量PCR检测 | 第106-108页 |
| ·斑点杂交 | 第108-109页 |
| ·组织化学染色(GUS基因检测) | 第109-110页 |
| ·桑树遗传转化情况的统计 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-116页 |
| ·整合水平上检测转基因植株 | 第111-113页 |
| ·表达水平上检测转基因植株 | 第113页 |
| ·两种介导法遗传转化率的统计与检测方法的比较 | 第113-116页 |
| 第七章 总结 | 第116-120页 |
| ·一个人工设计合成的MONELLIN基因研究 | 第116页 |
| ·MONELLIN基因在毕赤酵母中的表达研究 | 第116-117页 |
| ·不同培养方式对桑种萌发的影响研究 | 第117页 |
| ·桑树丛生芽的获得 | 第117页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化研究 | 第117-118页 |
| ·花粉介导的遗传转化研究 | 第118页 |
| ·转化植株的检测 | 第118-120页 |
| 论文的创新性 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-130页 |
| 博士在读期间发表文章 | 第130-132页 |
| 参与研究的课题及专利 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
