根癌农杆菌介导PtLRP1基因转化枳壳和烟草的研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 縮略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| ·课题的提出 | 第13-14页 |
| ·研究进展 | 第14-24页 |
| ·植物侧根发育的研究进展 | 第14-19页 |
| ·植物激素对植物侧根发育的调节 | 第15-17页 |
| ·养分胁迫对植物侧根发育的影响 | 第17-19页 |
| ·柑橘缺硼的研究进展 | 第19-21页 |
| ·LRP1基因的研究进展 | 第21-22页 |
| ·农杆菌转化的研究进展 | 第22-24页 |
| ·本课题研究内容及技术路线 | 第24-26页 |
| ·课题研究内容 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-31页 |
| ·枳壳根系总的RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·反转录 | 第27-28页 |
| ·PCR | 第28页 |
| ·纯化回收PCR产物并连接T载体 | 第28-29页 |
| ·转化与提质粒 | 第29-30页 |
| ·插入酶切位点 | 第30页 |
| ·1302表达载体的制备 | 第30-31页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第31-34页 |
| ·根癌农杆菌介导PtLRP1基因转化烟草 | 第31-32页 |
| ·烟草材料的准备 | 第31-32页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第32页 |
| ·烟草的转化以及阳性苗的筛选 | 第32页 |
| ·烟草苗的移栽 | 第32页 |
| ·根癌农杆菌介导PtLRP1基因转化枳壳上胚轴 | 第32-34页 |
| ·枳壳上胚轴材料的准备 | 第32-33页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第33页 |
| ·枳壳的转化以及阳性苗的筛选 | 第33-34页 |
| ·阳性苗鉴定 | 第34-35页 |
| ·烟草阳性苗的鉴定 | 第34-35页 |
| ·烟草抗性苗基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第34-35页 |
| ·枳壳阳性苗的鉴定 | 第35页 |
| ·PtLRP1基因在枳壳根中的RNA原位杂交 | 第35-38页 |
| ·材料的准备 | 第35-36页 |
| ·采样 | 第35-36页 |
| ·材料包埋 | 第36页 |
| ·探针的制备 | 第36页 |
| ·RNA原位杂交 | 第36-38页 |
| ·杂交前的准备 | 第36页 |
| ·杂交过程 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-50页 |
| ·PtLRP1超表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·PtLRP1cDNA的获得 | 第38-39页 |
| ·插入酶切位点 | 第39-40页 |
| ·1302-LRP1载体的获得 | 第40页 |
| ·1302-LRP1载体转化农杆菌 | 第40-41页 |
| ·烟草阳性苗的获得 | 第41-44页 |
| ·农杆菌介导烟草叶盘遗传转化 | 第41-42页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第42-44页 |
| ·枳壳阳性苗的获得 | 第44-46页 |
| ·农杆菌介导枳壳上胚轴遗传转化 | 第44-45页 |
| ·枳壳阳性苗的初步鉴定 | 第45-46页 |
| ·原位杂交 | 第46-50页 |
| ·探针的制备 | 第46-49页 |
| ·原位杂交 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·枳壳阳性苗的早期鉴定 | 第50页 |
| ·转基因枳壳植株的研究意义及展望 | 第50页 |
| ·原位杂交 | 第50-51页 |
| ·下一步的工作计划 | 第51-52页 |
| ·PtLRP1基因在转基因烟草中的功能验证 | 第51页 |
| ·PtLRP1基因在转基因枳壳中的功能验证 | 第51页 |
| ·PtLRP1基因自身启动子的克隆以及转基因 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
