| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩写词表 | 第13-14页 |
| 第一章 细胞周期基因过表达对油菜生长发育的影响 | 第14-55页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| ·农杆菌介导的油菜遗传转化体系 | 第14-20页 |
| ·影响油菜转化的因素 | 第14-17页 |
| ·外植体的基因型 | 第14-15页 |
| ·外植体的褐化、玻璃化 | 第15页 |
| ·抗生素种类及浓度 | 第15页 |
| ·转化体系中激素、试剂 | 第15-17页 |
| ·转化菌株和转化载体 | 第17页 |
| ·油菜子叶转化体系 | 第17-18页 |
| ·提高农杆菌的侵染力 | 第17-18页 |
| ·建立良好的生根系统 | 第18页 |
| ·油菜下胚轴转化体系 | 第18-20页 |
| ·高效诱导绿色愈伤组织 | 第18-19页 |
| ·诱导愈伤组织向芽分化 | 第19页 |
| ·防止下胚轴的褐化和玻璃化 | 第19-20页 |
| ·细胞周期基因对植物生长发育的影响 | 第20-28页 |
| ·细胞周期基因的类型 | 第20-25页 |
| ·周期蛋白依赖性激酶(CDK,Cyclin-dependent kinase) | 第20-22页 |
| ·细胞周期蛋白(Cyclins) | 第22-23页 |
| ·CDK/CYC的结合和调节蛋白 | 第23-24页 |
| ·CKS蛋白(CDK subunit) | 第23页 |
| ·ICK | 第23-24页 |
| ·CDK蛋白激酶 | 第24页 |
| ·Rb和E2F/DP/DEL | 第24-25页 |
| ·细胞周期基因之间的关系 | 第25页 |
| ·植物细胞周期基因的功能分析 | 第25-28页 |
| ·细胞周期基因与植物形态建成 | 第25-26页 |
| ·细胞周期基因与植物生长发育 | 第26-28页 |
| ·CDK对植株生长发育的影响 | 第27页 |
| ·CYCD对植物生长发育的影响 | 第27-28页 |
| ·ICK/KRP和E2F对植物生长发育的影响 | 第28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28-29页 |
| ·试验所用质粒和菌株 | 第29页 |
| ·工具酶 | 第29页 |
| ·分子生物学试剂 | 第29页 |
| ·试剂盒 | 第29页 |
| ·测序及引物合成 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-35页 |
| ·表达载体构建 | 第30-32页 |
| ·拟南芥基因组CYCD2；1基因全长片段的扩增 | 第30页 |
| ·目的片段回收 | 第30-31页 |
| ·中间载体构建 | 第31页 |
| ·电击转化感受态农杆菌GV3101 | 第31-32页 |
| ·油菜遗传转化和转基因植株的鉴定 | 第32-34页 |
| ·油菜的遗传转化：暗光培养法 | 第32页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第32-34页 |
| ·油菜转基因植株的表达分析 | 第34页 |
| ·油菜转基因植株的RNA提取(Trizol法) | 第34页 |
| ·转基因植株的RT-PCR分析 | 第34页 |
| ·叶片下表皮细胞大小观察 | 第34-35页 |
| 3 结果和分析 | 第35-53页 |
| ·农杆菌介导的油菜遗传转化体系 | 第35-38页 |
| ·外植体材料的选择 | 第35页 |
| ·油菜转化程序的选择和确定 | 第35-38页 |
| ·抗生素的选择 | 第38页 |
| ·转基因植株的检测 | 第38-41页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·GUS基因表达检测 | 第39-40页 |
| ·T1代种子在抗性选择培养基中的生长 | 第40-41页 |
| ·油菜转化株中转化基因在mRNA水平上的表达 | 第41-43页 |
| ·CYCD2；1(cDNA)表达剪切模式异常 | 第41页 |
| ·基因组序列的CYCD2；1转化株的表达模式正常 | 第41-42页 |
| ·转CYCD3；1基因油菜表达结果 | 第42-43页 |
| ·转化ATCDKA；1基因油菜表达结果 | 第43页 |
| ·CYCD3；1转基因植株的表型分析 | 第43-44页 |
| ·CYCD3；1转化株系的营养生长受到抑制 | 第43-44页 |
| ·CYCD2；1转基因植株的表型分析 | 第44-53页 |
| ·CYCD2；1转化系的营养生长受到抑制 | 第44-45页 |
| ·转化CYCD2；1基因导致转化系花期延迟 | 第45-47页 |
| ·转化CYCD2；1影响叶的形态发生 | 第47页 |
| ·CYCD2；1的过表达导致转化株的叶片下表皮细胞变小 | 第47-48页 |
| ·CYCD2；1的过表达延迟转化株叶片下表皮细胞的发育 | 第48-49页 |
| ·CYCD2；1过表达影响了转化株叶片背腹性的发育 | 第49-50页 |
| ·CYCD2；1过表达促进转化系叶片细胞的G1-S转换期的进程 | 第50页 |
| ·转化株中CYCD2；1转录水平和转化株表型成正相关 | 第50-52页 |
| ·转化株拷贝数与其CYCD2；1转录水平相关 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·cDNA序列构建的CYCD2；1载体的表达有两种模式 | 第53页 |
| ·CYCD2；1转化株的生育期延迟 | 第53-54页 |
| ·CYCD2；1基因具有多重功能 | 第54-55页 |
| 第二章 拟南芥种子发育基因ASD的功能分析 | 第55-99页 |
| 1 前言 | 第55-61页 |
| ·种胚发育过程 | 第55-56页 |
| ·配子体发育的相关基因及其突变体 | 第56-57页 |
| ·种胚发育的相关基因及其突变体 | 第57-60页 |
| ·叶绿体类囊体发育的相关基因及其突变体 | 第60-61页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第61页 |
| 2 材料和方法 | 第61-70页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·材料来源 | 第61-62页 |
| ·分子生物学技术 | 第62页 |
| ·化学试剂 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-70页 |
| ·拟南芥的培养与管理 | 第62-63页 |
| ·定位群体构建 | 第63-65页 |
| ·F1代真假杂种的鉴定 | 第63页 |
| ·拟南芥叶片DNA小样抽提法(CTAB法) | 第63页 |
| ·InDel标记及其引物 | 第63-64页 |
| ·PCR扩增 | 第64页 |
| ·PCR产物的电泳检测 | 第64-65页 |
| ·4%琼脂糖凝胶电泳检测 | 第64页 |
| ·PAGE凝胶电泳检测 | 第64-65页 |
| ·半定量RT-PCR | 第65-66页 |
| ·拟南芥的根,茎,叶和花序的方法按照TRIZOL的方法提取总RNA | 第65页 |
| ·拟南芥果荚和种子RNA提取 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR | 第66页 |
| ·胚发育过程观察 | 第66页 |
| ·透射电镜制备 | 第66-67页 |
| ·载体构建 | 第67-69页 |
| ·构建载体引物 | 第67页 |
| ·PCR扩增 | 第67-68页 |
| ·目的片段回收 | 第68页 |
| ·中间载体构建 | 第68页 |
| ·电击转化感受态农杆菌GV3101 | 第68-69页 |
| ·拟南芥转化(花蘸法) | 第69页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第69页 |
| ·花蘸法转化拟南芥 | 第69页 |
| ·转基因植株的筛选和鉴定 | 第69-70页 |
| ·启动子分析的转化植株 | 第69-70页 |
| ·互补试验的转化植株 | 第70页 |
| ·烟草转化方法 | 第70页 |
| 3 结果和分析 | 第70-91页 |
| ·突变体的表型 | 第70-71页 |
| ·突变体遗传分离规律 | 第71-73页 |
| ·突变插入位点的检测 | 第73-74页 |
| ·突变体植株T-DNA插入拷贝数的确定 | 第74-75页 |
| ·突变体的定位 | 第75-80页 |
| ·粗定位(第一轮) | 第76-77页 |
| ·第二轮定位 | 第77-78页 |
| ·第三轮定位 | 第78-79页 |
| ·第4轮定位 | 第79-80页 |
| ·候选基因预测 | 第80-84页 |
| ·候选基因的序列分析 | 第82-83页 |
| ·突变体的反向遗传证明 | 第83-84页 |
| ·等位基因同一性测验 | 第84-85页 |
| ·ASD突变体互补试验 | 第85页 |
| ·突变的胚发育异常且停滞在球形期 | 第85-86页 |
| ·突变体败育和正常种子在培养基中的生长发育 | 第86-87页 |
| ·突变体种子中胚细胞的叶绿体的发育受阻 | 第87-88页 |
| ·At1g35680基因的分析 | 第88-91页 |
| ·At1g35680基因编码蛋白RPL21C的亚细胞定位 | 第89-90页 |
| ·At1g35680基因的时空表达模式 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-99页 |
| ·RPL21C蛋白可能促进新生肽链的合成 | 第91-94页 |
| ·ASD突变体中叶绿体的发育受到了抑制 | 第94-96页 |
| ·RPL21基因在147位的A或T可能来自自然的进化结果 | 第96-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简介 | 第111-112页 |
| 附录 | 第112-114页 |
