| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-51页 |
| 1 材料 | 第13-24页 |
| ·分子生物学试剂 | 第13-14页 |
| ·免疫和蛋白质分离纯化试剂 | 第14-16页 |
| ·表面等离子体共振生物传感器试剂及芯片 | 第16页 |
| ·合成肽 | 第16-18页 |
| ·核酸分子探针 | 第18页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·质粒载体 | 第18-20页 |
| ·设计引物 | 第20页 |
| ·菌株和细胞株 | 第20页 |
| ·血清样本资料 | 第20-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-51页 |
| ·常用的分子生物学方法 | 第24-27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·DNA片段的琼脂糖凝胶电泳回收 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·DNA转化感受态细菌 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白质的提取、纯化和切割 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白质样品准备 | 第27-28页 |
| ·过柱前试剂准备 | 第28页 |
| ·样品过柱纯化步骤 | 第28页 |
| ·肠肽酶(Enterkinase)切割His融合蛋白质 | 第28页 |
| ·融合的蛋白质过分子筛去除残余宿主蛋白质以及内毒素 | 第28-29页 |
| ·样品准备 | 第28-29页 |
| ·上柱前试剂准备 | 第29页 |
| ·样品过Sephacryl S300纯化 | 第29页 |
| ·鲎试剂定量法检测纯化蛋白质和DNA质粒疫苗残存内毒素含量 | 第29页 |
| ·蛋白质浓度的检测 | 第29-30页 |
| ·紫外吸收法检测蛋白质浓度 | 第29页 |
| ·Brandford法测蛋白质浓度 | 第29-30页 |
| ·Western Blot | 第30-34页 |
| ·Laemmli凝胶电泳法 | 第30-32页 |
| ·用转移槽转移蛋白质 | 第32-33页 |
| ·免疫印迹 | 第33-34页 |
| ·免疫程序 | 第34-35页 |
| ·小鼠免疫 | 第34页 |
| ·新西兰白兔免疫 | 第34-35页 |
| ·恒河猴免疫 | 第35页 |
| ·酶联免疫吸附测定 | 第35-36页 |
| ·亚硝酸盐/硝酸盐浓度的测定 | 第36-37页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第37-40页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第37页 |
| ·酶联免疫斑点(ELISPOT)检测分泌IFN-γ和IL-4特异性T细胞的频数 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR半定量检测细胞因子的表达情况 | 第38-40页 |
| ·从兔/猴抗血清中纯化IgG | 第40-42页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第42页 |
| ·免疫透射电镜 | 第42-43页 |
| ·生物传感器检测抗原与抗体结合和解离反应 | 第43-45页 |
| ·不同的核酸染料标记感染红细胞荧光分析 | 第45页 |
| ·流式细胞术检测虫血率 | 第45页 |
| ·恶性疟原虫的体外培养 | 第45-48页 |
| ·溶液配方 | 第45-46页 |
| ·细胞复苏步骤 | 第46-47页 |
| ·细胞换液 | 第47页 |
| ·细胞的冻存 | 第47页 |
| ·恶性疟原虫同步化培养 | 第47-48页 |
| ·抗血清IgG对恶性疟原虫的作用 | 第48-51页 |
| ·对早期恶性疟原虫的体外生长抑制 | 第48页 |
| ·对晚期恶性疟原虫的体外生长抑制(裂殖子攻击阻断实验) | 第48-49页 |
| ·抗体介导的细胞抑制恶性疟生长实验 | 第49-51页 |
| 实验流程图 | 第51-52页 |
| 实验结果 | 第52-104页 |
| 第一部分:M.RCAg-1疫苗的提取制备及流行病学分析 | 第52-60页 |
| 1 M.RCAg-1基因疫苗的制备和鉴定 | 第52-53页 |
| 2 M.RCAg-1蛋白质疫苗的制备和鉴定 | 第53-55页 |
| 3 流行区居民血清对M.RC-Ag1蛋白质的识别 | 第55-60页 |
| 第二部分:M.RC-Ag1疫苗在小鼠体内免疫原性及其免疫机制初探 | 第60-74页 |
| 1 M.RCAg-1基因疫苗在小鼠体内免疫原性及其免疫机制初探 | 第60-64页 |
| 2 M.RCAg-1蛋白质疫苗在小鼠体内免疫原性及其免疫机制初探 | 第64-74页 |
| 第三部分:M.RC-Ag1疫苗在新西兰白兔体内的免疫原性及体外免疫保护实验 | 第74-86页 |
| 1 M.RCAg-1基因疫苗在新西兰白兔体内免疫原性和体外抑虫效应 | 第74-75页 |
| 2 M.RCAg-1蛋白质疫苗在新西兰白兔体内免疫原性和体外抑虫效应 | 第75-86页 |
| 第四部分:M.RCAg-1疫苗在恒河猴体内的免疫原性及体外免疫保护实验 | 第86-99页 |
| 1 筛选低背景和无疟疾感染史的恒河猴及其分组 | 第86-87页 |
| 2 M.RCAg-1基因疫苗在恒河猴体内的免疫原性和体外抑虫效应 | 第87-92页 |
| 3 M.RCAg-1蛋白质疫苗在恒河猴体内的免疫原性和体外抑虫效应 | 第92-99页 |
| 第五部分:流式细胞术检测恶性疟原虫虫血率方法探索 | 第99-104页 |
| 1 不同核酸染料标记感染红细胞的荧光观察 | 第99-100页 |
| 2 利用hydroethidine标记感染红细胞流式细胞术检测培养物虫血率 | 第100-104页 |
| 讨论 | 第104-114页 |
| 小结 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-118页 |
| 文献综述一:红期疟疾疫苗的免疫效应机制研究进展 | 第118-128页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 文献综述二:恶性疟候选疫苗研究的最新进展 | 第128-143页 |
| 参考文献 | 第137-143页 |
| 文献综述三:疫苗佐剂的研究进展 | 第143-150页 |
| 参考文献 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 附录Ⅰ:博士生期间发表的文章和参加的会议 | 第151-152页 |
| 附录Ⅱ:常用英汉缩略语 | 第152-153页 |
