| 1． 前言 | 第1-26页 |
| 1．1． 卵泡发育模式 | 第10-14页 |
| 1．1．1． 卵泡发育的基本过程 | 第10页 |
| 1．1．2． 卵泡的募集选择和优势化 | 第10-12页 |
| 1．1．3． 牛和羊的卵泡波 | 第12-14页 |
| 1．2． 卵泡闭锁和颗粒细胞凋亡 | 第14-19页 |
| 1．2．1． 细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1．2．2． 卵泡闭锁 | 第15-16页 |
| 1．2．2．1． 卵泡闭锁的定义 | 第15页 |
| 1．2．2．2． 卵泡闭锁的时期 | 第15页 |
| 1．2．2．3． 卵泡闭锁的分类 | 第15-16页 |
| 1．2．2．4． 卵泡闭锁的生化特征 | 第16页 |
| 1．2．3． 卵泡闭锁中的颗粒细胞凋亡 | 第16-19页 |
| 1．2．3．1． 卵泡中凋亡细胞的类型及分布 | 第17页 |
| 1．2．3．2． 颗粒细胞凋亡的研究 | 第17-19页 |
| 1．3． 影响卵泡发育、闭锁以及颗粒细胞凋亡的因子 | 第19-23页 |
| 1．3．1． 促性腺激素 | 第19-20页 |
| 1．3．2． 类固醇激素 | 第20-21页 |
| 1．3．3． 胰岛素样生长因子 | 第21-23页 |
| 1．4． FSH和IGF控制卵泡发育闭锁以及颗粒细胞凋亡的信号途径 | 第23-25页 |
| 1．4．1． PKA途径 | 第23页 |
| 1．4．2． P13-K／PKB信号途径 | 第23-24页 |
| 1．4．3． MAPK途径 | 第24-25页 |
| 1．5． 研究的主要内容 | 第25-26页 |
| 2． 材料与方法 | 第26-31页 |
| 2．1． 动物处理与卵巢获取 | 第26页 |
| 2．2． 卵泡分类、记数以及颗粒细胞和卵泡液的收集 | 第26页 |
| 2．3． 完整卵泡的剥离 | 第26页 |
| 2．4． 完整卵泡、颗粒细胞以及卵丘卵母细胞复合体的培养 | 第26-27页 |
| 2．5． 颗粒细胞涂片和TUNEL原位凋亡分析 | 第27页 |
| 2．6． 颗粒细胞的DNA梯状电泳分析 | 第27-28页 |
| 2．7． RT-PCR | 第28-30页 |
| 2．7．1． RNA的提取 | 第28页 |
| 2．7．2． DNA消化抽提以及沉淀 | 第28-29页 |
| 2．7．3． 反转录反应体系 | 第29页 |
| 2．7．4． PCR反应 | 第29-30页 |
| 2．7．4．1． PCR引物 | 第29页 |
| 2．7．4．2． PCR反应体系 | 第29页 |
| 2．7．4．3． PCR扩增条件 | 第29-30页 |
| 2．8． 放射性免疫检测（RIA） | 第30页 |
| 2．9． 统计分析 | 第30-31页 |
| 3． 结果 | 第31-52页 |
| 3．1． 不同发情时期山羊卵泡发育和闭锁及类固醇激素水平的变化 | 第31-35页 |
| 3．1．1． 卵泡数目的变化 | 第31页 |
| 3．1．2． 颗粒细胞凋亡比例的变化 | 第31-32页 |
| 3．1．3． 孕酮水平的变化 | 第32-34页 |
| 3．1．4． 雌二醇水平的变化 | 第34页 |
| 3．1．5． 卵泡液中E2／P4比例的变化 | 第34-35页 |
| 3．2． FSH对体内卵泡发育、颗粒细胞凋亡及卵巢中IGF-Ⅰ，IGF-Ⅱ和IGFR mRNA表达的影响 | 第35-40页 |
| 3．2．1． FSH对卵泡数目的影响 | 第35页 |
| 3．2．2． FSH对颗粒细胞凋亡的影响 | 第35页 |
| 3．2．3． FSH对孕酮、雌二醇分泌的影响 | 第35-38页 |
| 3．2．4． FSH对卵巢中IGF-1、IGF-2和IGFR mRNA表达的影响 | 第38页 |
| 3．2．5． FSH对血清和卵泡液中IGF-1和IGF-2水平的影响 | 第38-40页 |
| 3．3． 不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡及类固醇激素和IGFs的分泌 | 第40-45页 |
| 3．3．1． 壁颗粒细胞DNA梯状电泳分析 | 第40页 |
| 3．3．2． 不同健康程度的GOCs DNA梯度电泳 | 第40页 |
| 3．3．3． 健康程度不同的卵泡中A类和退化COCs的分布 | 第40-42页 |
| 3．3．4． 卵泡液中孕酮和雌二醇的含量 | 第42-43页 |
| 3．3．5． IGF-Ⅰ，IGF-2，IGFR mRNA表达的不 | 第43页 |
| 3．3．6． 卵泡液中IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的水平 | 第43-44页 |
| 3．3．7． 不同健康程度卵泡中颗粒细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 3．4． 体外培养完整卵泡检测FSH和IGF-Ⅰ的作用 | 第45-47页 |
| 3．4．1． FSH和IGF-Ⅰ对卵泡壁颗粒细胞凋亡的抑制作用 | 第45页 |
| 3．4．2． FSH和IGF-Ⅰ对COCs退化的抑制作用 | 第45-46页 |
| 3．4．3． FSH和IGF-Ⅰ对卵泡孕酮、雌二醇分泌的促进作用 | 第46-47页 |
| 3．4．4． FSH对IGF-1和IGF-2分泌的作用 | 第47页 |
| 3．5． 体外培养颗粒细胞检测FSH和IGF-Ⅰ的作用 | 第47-49页 |
| 3．5．1． FSH和IGF-1对颗粒细胞凋亡的抑制 | 第47-48页 |
| 3．5．2． FSH和IGF-Ⅰ对孕酮和雌二醇分泌的影响 | 第48页 |
| 3．5．3． FSH对IGF-1和IGF-2分泌的作用 | 第48-49页 |
| 3．6． 体外培养COCs检测FSH和IGF-Ⅰ的作用 | 第49-50页 |
| 3．6．1． FSH和IGF对卵母细胞成熟以及颗粒细胞凋亡的作用 | 第49-50页 |
| 3．7． 卵泡闭锁中颗粒细胞凋亡现象以及检测方法 | 第50-52页 |
| 3．7．1． TUNEL原位标记及苏木精染色检测颗粒细胞凋亡 | 第50页 |
| 3．7．2． 卵泡闭锁过程中凋亡细胞的类型以及分布 | 第50-52页 |
| 4． 讨论 | 第52-62页 |
| 4．1． 卵泡闭锁中颗粒细胞凋亡现象及检测方法 | 第52页 |
| 4．2． 不同发情时期卵泡发育以及颗粒细胞凋亡的变化 | 第52-55页 |
| 4．2．1． 发情周期中不同大小卵泡数目的变化 | 第52-53页 |
| 4．2．2． 发情不同时期卵泡液和血清中孕酮和雌二醇浓度的变化 | 第53-54页 |
| 4．2．3． 发情周期与卵泡颗粒细胞凋亡的关系 | 第54-55页 |
| 4．3． FSH对卵泡发育、颗粒细胞凋亡以及类固醇激素分泌的影响 | 第55-57页 |
| 4．3．1． FSH对体内卵泡发育的影响 | 第55页 |
| 4．3．2． FSH对类固醇激素分泌的影响 | 第55-56页 |
| 4．3．3． FSH对卵泡液中IGF-1和IGF-2水平的影响 | 第56页 |
| 4．3．4． FSH对颗粒细胞凋亡的抑制作用 | 第56-57页 |
| 4．4． 不同健康程度卵泡中颗粒细胞凋亡及类固醇激素和IGFs水平的变化 | 第57-59页 |
| 4．4．1． 颗粒细胞凋亡的DNA梯状电泳检测 | 第57页 |
| 4．4．2． 卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡及卵丘卵母细胞复合体退化的关系 | 第57-58页 |
| 4．4．3． 卵泡闭锁程度及颗粒细胞凋亡比例与类固醇分泌间的关系 | 第58页 |
| 4．4．4． 卵泡闭锁过程中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及IGFR mRNA表达的变化 | 第58-59页 |
| 4．5． FSH和IGF-Ⅰ对体外培养卵泡、颗粒细胞及COC的作用 | 第59-61页 |
| 4．5．1． FSH和IGF-Ⅰ对体外培养卵泡的作用 | 第59-60页 |
| 4．5．2． FSH和IGF-Ⅰ对体外培颗粒细胞的作用 | 第60-61页 |
| 4．5．3． FSH和IGF-Ⅰ对体外培COCs的作用 | 第61页 |
| 4．6． FSH和IGF-Ⅰ作用途径分析 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-78页 |
| 图版及图板说明 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80页 |
