| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-25页 |
| 1.核糖体失活蛋白的研究进展 | 第10-16页 |
| 2.丝瓜核糖体失活蛋白的研究进展 | 第16-18页 |
| 3.蛋白质的定向进化 | 第18-23页 |
| 4.本课题研究的内容 | 第23-25页 |
| 材料和方法 | 第25-31页 |
| 1.材料 | 第25-29页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25页 |
| ·器材及试验材料 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·试剂配制 | 第26-28页 |
| ·菌株和载体 | 第28-29页 |
| ·基因和引物序列 | 第29页 |
| 2.方法 | 第29-31页 |
| 第一部分 Iuffin-b基因的快速克隆 | 第31-35页 |
| ·丝瓜籽基因组的提取 | 第31页 |
| ·PCR反应扩增luffin-b基因 | 第31-32页 |
| ·PCR产物测序 | 第32页 |
| ·luffin-b基因的克隆 | 第32-35页 |
| 第二部分 Iuffin-b基因的表达 | 第35-40页 |
| ·制备表达载体pET-28a(+)DNA | 第35页 |
| ·双酶切PCR产物和表达载体DNA | 第35-36页 |
| ·回收目的基因片段和表达载体分子 | 第36页 |
| ·DNA分子的连接重组 | 第36页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组子转化受体菌 | 第37-38页 |
| ·利用表达菌株表达luffin-b基因 | 第38页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第38-40页 |
| 第三部分 Iuffin-b蛋白的体外定向进化 | 第40-42页 |
| ·易错PCR | 第40-41页 |
| ·易错luffin-b基因克隆 | 第41页 |
| ·阳性鉴定 | 第41-42页 |
| 实验结果 | 第42-59页 |
| 第一部分 Iuffin-b基因的快速克隆 | 第42-47页 |
| ·Iuffin-b基因的扩增及测序 | 第42-44页 |
| ·低熔点琼脂糖回收luffin-b基因 | 第44页 |
| ·连接转化结果 | 第44页 |
| ·重组质粒pUCm-T-luffin-b的测序结果 | 第44-47页 |
| 第二部分 Iuffin-b基因的的表达 | 第47-52页 |
| ·PCR产物和表达载体pET-28a(+)DNA的双酶切电泳鉴定 | 第47页 |
| ·luffin-b基因的重组克隆结果 | 第47-48页 |
| ·重组子的鉴定 | 第48-51页 |
| ·重组子转化表达菌株BL21后的克隆结果 | 第51页 |
| ·luffin-b基因诱导表达后产物的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 第三部分 Iuffin-b蛋白的体外定向进化 | 第52-59页 |
| ·易错PCR产物电泳及测序结果 | 第52-58页 |
| ·易错luffin-b基因转化至克隆菌株DH5α中的结果 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-63页 |
| 1.研究luffin-b基因有无内含子的原因 | 第59页 |
| 2.研究最适诱导温度的原因 | 第59页 |
| 3.研究过程中遇到的问题及解决方法 | 第59-60页 |
| 4.取得的成绩及展望 | 第60-62页 |
| 5.本次研究的不足及原因分析 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第69-70页 |
| 附录 缩略词中英文对照表 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
