| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 前言 | 第12-41页 |
| ·木薯的生物学特性及经济意义 | 第12-15页 |
| ·木薯的起源及分布 | 第12页 |
| ·木薯的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·木薯的经济价值及用途 | 第13-15页 |
| ·木薯的组织培养及遗传转化的研究进展 | 第15-19页 |
| ·木薯的组织培养 | 第15-18页 |
| ·木薯的遗传转化 | 第18-19页 |
| ·生物技术在木薯育种中的应用 | 第19-22页 |
| ·分子标记辅助育种 | 第19-20页 |
| ·木薯的转基因育种研究 | 第20-22页 |
| ·腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)基因的研究进展 | 第22-32页 |
| ·植物淀粉生物合成代谢机制 | 第23-26页 |
| ·AGPase的分子结构 | 第26-27页 |
| ·AGPase的酶学特征 | 第27-29页 |
| ·AGPase的配体结合位点 | 第29页 |
| ·AGPase的分子生物学 | 第29-31页 |
| ·AGPase的应用 | 第31-32页 |
| ·植物遗传转化方法研究进展 | 第32-39页 |
| ·直接转化法 | 第32-35页 |
| ·间接转移系统法 | 第35-36页 |
| ·生殖细胞转化法 | 第36-39页 |
| ·本研究的目的意义 | 第39-40页 |
| ·本研究的技术路线 | 第40-41页 |
| 2 AGPase基因的克隆、定点突变及原核表达 | 第41-58页 |
| ·材料与试剂 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-51页 |
| ·glgC基因的克隆 | 第41-46页 |
| ·glgC基因的定点突变 | 第46-47页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第47-48页 |
| ·工程菌pET-C(336)/BL21(DE3)的构建与筛选 | 第48-49页 |
| ·glgC(336)基因的诱导表达 | 第49页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE分析 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·glgC基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·glgC基因的序列测定 | 第52-53页 |
| ·glgC基因的定点突变 | 第53-54页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·glgC(336)基因的诱导表达及SDS-PAGE电泳分析 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·AGPase基因突变位点对该酶活性的影响 | 第56-57页 |
| ·定点突变技术 | 第57-58页 |
| 3 AGPase突变基因植物表达载体的构建及转化烟草 | 第58-73页 |
| ·材料与试剂 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-65页 |
| ·植物表达载体pCB-C336的构建 | 第58-62页 |
| ·烟草外植体的转化与抗Kan再生植株筛选 | 第62页 |
| ·转化抗性再生烟草植株的GUS检测 | 第62页 |
| ·转化抗性再生烟草植株的PCR检测 | 第62-63页 |
| ·转基因烟草植株的RT-PCR检测 | 第63-65页 |
| ·转基因烟草淀粉含量测定 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-70页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第65-68页 |
| ·农杆菌转化 | 第68页 |
| ·转化抗性再生烟草植株的获得及GUS检测 | 第68-69页 |
| ·转化抗性再生烟草的分子检测 | 第69-70页 |
| ·转基因烟草的淀粉含量测定 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| ·AGPase的组成型表达对烟草淀粉含量及生长发育的影响 | 第70-71页 |
| ·关于转化模式植物-烟草的意义 | 第71-72页 |
| ·关于植物表达载体的构建策略 | 第72页 |
| ·关于GUS染色 | 第72-73页 |
| 4 木薯再生体系的建立与优化 | 第73-90页 |
| ·植物材料与试剂 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·侧芽茎尖外植体的获得 | 第73页 |
| ·初生胚状体的诱导 | 第73-74页 |
| ·初生胚状体的成熟培养 | 第74-75页 |
| ·成熟胚状体再生成完整植株 | 第75页 |
| ·木薯芽器官发生及其植株再生 | 第75-76页 |
| ·练苗移栽及田间管理 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-87页 |
| ·初生胚状体的诱导 | 第76-79页 |
| ·不同品种对体细胞胚胎发生的影响 | 第76-78页 |
| ·2，4-D浓度对体细胞胚胎发生的影响 | 第78页 |
| ·外植体类型对体细胞胚胎发生的影响 | 第78-79页 |
| ·其他因素 | 第79页 |
| ·初生胚状体的成熟培养 | 第79-81页 |
| ·成熟天数对次生胚状体诱导的影响 | 第80页 |
| ·碳源对次生胚状体诱导的影响 | 第80-81页 |
| ·成熟胚状体再生成完整植株 | 第81-83页 |
| ·胚状体茎的伸长 | 第81页 |
| ·胚状体的生根 | 第81页 |
| ·不同品种对体细胞胚胎发生植株再生频率的影响 | 第81-83页 |
| ·胚状体子叶诱导不定芽器官发生 | 第83-87页 |
| ·不定芽的诱导、伸长与生根 | 第83-84页 |
| ·不同品种对不定芽发生频率的影响 | 第84页 |
| ·AgNO_3对不定芽发生频率的影响 | 第84-85页 |
| ·成熟天数对不定芽发生频率的影响 | 第85-86页 |
| ·不同碳源对不定芽发生频率的影响 | 第86-87页 |
| ·练苗移栽及田间管理 | 第87页 |
| ·讨论 | 第87-90页 |
| ·木薯胚状体发生与植株的再生 | 第87-88页 |
| ·玻璃化与褐化问题 | 第88页 |
| ·AgNO_3对木薯不定芽发生的影响 | 第88-90页 |
| 5 AGPase突变基因转化木薯 | 第90-122页 |
| ·材料与试剂 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-101页 |
| ·根部特异启动子Sporamin的克隆 | 第90-92页 |
| ·植物表达载体pSP-C336构建 | 第92-93页 |
| ·农杆菌介导的木薯遗传转化 | 第93-95页 |
| ·植物材料的准备 | 第93-94页 |
| ·抗生素梯度试验 | 第94页 |
| ·农杆菌活化与培养 | 第94页 |
| ·遗传转化参数的优化 | 第94页 |
| ·木薯转化 | 第94-95页 |
| ·基因枪介导的木薯遗传遗传转化 | 第95-96页 |
| ·质粒的准备 | 第95页 |
| ·受体材料的准备 | 第95页 |
| ·微弹的制备 | 第95页 |
| ·基因枪轰击 | 第95-96页 |
| ·转化抗性再生植株的分子检测 | 第96-100页 |
| ·转基因植株块根AGPase活性测定 | 第100-101页 |
| ·转基因植株块根淀粉含量测定 | 第101页 |
| ·结果与分析 | 第101-117页 |
| ·块根特异启动子的克隆与序列分析 | 第101-102页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第102-105页 |
| ·中间表达载体的构建 | 第102-103页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第103-105页 |
| ·重组质粒pSP-C336转化农杆菌 | 第105页 |
| ·农杆菌介导的木薯遗传转化 | 第105-111页 |
| ·抗生素梯度试验 | 第105-107页 |
| ·遗传转化参数的优化 | 第107-110页 |
| ·木薯转化抗性再生植株的获得 | 第110-111页 |
| ·基因枪介导的转化 | 第111-113页 |
| ·遗传转化参数的优化 | 第111-112页 |
| ·恢复培养 | 第112-113页 |
| ·木薯转化抗性再生植株的获得 | 第113页 |
| ·转化再生植株的分子检测 | 第113-116页 |
| ·转化抗性再生植株的PCR检测 | 第113页 |
| ·转化抗性再生植株的Southern杂交验证 | 第113-115页 |
| ·转基因木薯的RT-PCR表达分析 | 第115页 |
| ·转基因木薯的Northern杂交验证 | 第115-116页 |
| ·转基因木薯植株块根AGPase活性和淀粉含量测定 | 第116-117页 |
| ·讨论 | 第117-122页 |
| ·木薯遗传转化中的影响因素 | 第117-118页 |
| ·关于假转化体和基因沉默 | 第118页 |
| ·两种转化方法的比较 | 第118-119页 |
| ·生物质能源产业与木薯基因工程育种 | 第119-122页 |
| 6 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-136页 |
| 缩略词 | 第136-137页 |
| 附图 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
