| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·环境重金属污染的微生物修复 | 第8-12页 |
| ·目的菌 | 第9页 |
| ·靶蛋白 | 第9-11页 |
| ·工程菌构建策略 | 第11-12页 |
| ·金属硫蛋白及其突变体 | 第12-17页 |
| ·MT的定义和基本特性 | 第12-13页 |
| ·MT的分类 | 第13-14页 |
| ·MT的性质 | 第14页 |
| ·MT的功能 | 第14-15页 |
| ·MT的结构 | 第15-16页 |
| ·MT金属结合特性及其突变体 | 第16-17页 |
| ·串连多聚体构建 | 第17页 |
| ·研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 2. 金属硫蛋白A域(MTA)原核表达克隆的构建、表达及纯化 | 第18-34页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-26页 |
| ·MTα基因序列的设计及克隆 | 第20-21页 |
| ·MTα基因片段的TA克隆及回收 | 第21-22页 |
| ·原核表达载体pGEX-2T的酶切、去磷酸化处理及酶连检测 | 第22页 |
| ·pGEX-2T与MTα基因的连接及阳性重组子的筛选 | 第22-23页 |
| ·MTα基因在E. coli JM109与E. coli BL21体内表达效率对比 | 第23页 |
| ·不同浓度IPTG诱导表达情况对比 | 第23-24页 |
| ·菌体收获时间的确定 | 第24页 |
| ·不含镉的融合蛋白少量表达 | 第24页 |
| ·MTα-Cd的分离、活性测定及MTα结构预测 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-34页 |
| ·MTα基因序列的设计及克隆结果 | 第26页 |
| ·pTA2-MTα的鉴定与MTα基因片段的回收结果 | 第26-28页 |
| ·pGEX-2T的酶切及去磷酸化结果 | 第28-29页 |
| ·pGEX-MTα的获得情况 | 第29页 |
| ·MTα在E.coli JM109与E.coli BL21内表达效率对比 | 第29-30页 |
| ·不同浓度IPTG诱导表达情况对比 | 第30-31页 |
| ·菌体收获时间确定 | 第31-32页 |
| ·不含镉的融合蛋白的少量制备 | 第32页 |
| ·GST-MTα融合蛋白纯化结果及活性测定及结构预测 | 第32-34页 |
| 3 MTA基因串连体的构建及工程菌的重金属吸附 | 第34-45页 |
| ·实验材料与菌株 | 第34页 |
| ·工程菌构建及其重金属吸附量测定 | 第34-38页 |
| ·MTα串连体的构建 | 第34-35页 |
| ·相关序列 | 第35页 |
| ·MTα基因串连体的获得 | 第35-37页 |
| ·工程菌构建 | 第37页 |
| ·工程菌的镉抗性测定 | 第37页 |
| ·工程菌对镉吸附量的测定 | 第37页 |
| ·工程菌对锌吸附量的测定 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·MTα基因串连体 | 第38-39页 |
| ·生物信息学方法分析突变蛋白质结构 | 第39-40页 |
| ·工程菌对镉的抗性 | 第40-43页 |
| ·工程菌对镉的吸附量 | 第43-44页 |
| ·工程菌对锌的吸附量 | 第44-45页 |
| 4. 结论 | 第45-46页 |
| 5. 参考文献 | 第46-49页 |
| 6. 附录 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
