| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 文献综述 | 第17-37页 |
| 1 家禽的繁殖生理概述 | 第17-19页 |
| 2 影响畜禽繁殖性能的因素 | 第19-35页 |
| ·下丘脑-垂体-性腺轴对繁殖的调控 | 第19-20页 |
| ·促卵泡素刺激卵泡发育 | 第20-24页 |
| ·低密度脂蛋白受体基因家族介导卵黄沉积 | 第24-26页 |
| ·骨形态发生蛋白家族对卵泡成熟的影响 | 第26-30页 |
| ·BMP 系统和卵泡发生 | 第27-29页 |
| ·BMP 系统：调节排卵率的关键成分 | 第29-30页 |
| ·胰岛素样生长因子与卵泡发育的关系 | 第30-33页 |
| ·IGF 系统元件 | 第30-31页 |
| ·IGF 系统和卵巢卵泡发生 | 第31-33页 |
| ·限饲与禽类繁殖性能的关系 | 第33页 |
| ·家禽就巢性的研究 | 第33-35页 |
| ·其他 | 第35页 |
| 3 基因表达差异的研究方法 | 第35页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第35-37页 |
| 材料与方法 | 第37-46页 |
| 1 试验材料 | 第37-39页 |
| ·试验动物和样品采集 | 第37页 |
| ·菌株和载体 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·酶和试剂 | 第38页 |
| ·主要数据库及生物软件 | 第38-39页 |
| 2 试验方法 | 第39-46页 |
| ·常用试剂的配制 | 第39-40页 |
| ·鸡血液中 DNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·总RNA 的制备 | 第41-42页 |
| ·克隆和测序 | 第42-44页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第42-43页 |
| ·连接 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第43-44页 |
| ·小量制备质粒DNA | 第44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定和测序 | 第44页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
| ·统计分析 | 第45-46页 |
| 试验一 鸡FSHR 5’调控区的克隆及其与产蛋性能的关系 | 第46-63页 |
| 1 试验材料 | 第46页 |
| 2 试验方法 | 第46-48页 |
| ·鸡血液DNA 的提取 | 第46页 |
| ·引物设计和扩增 | 第46页 |
| ·扩增产物的克隆和测序和比对 | 第46-47页 |
| ·序列多态性分析 | 第47页 |
| ·统计分析 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·鸡血中提取的基因组DNA | 第48页 |
| ·鸡FSHR 5’调控区序列的克隆、测序 | 第48-49页 |
| ·FSHR 5’调控区片段1 和片段2 的扩增 | 第48-49页 |
| ·FSHR 5’调控区的克隆测序 | 第49页 |
| ·FSHR 5’调控区的序列分析 | 第49-55页 |
| ·FSHR 5’调控区的序列组装 | 第49-50页 |
| ·FSHR 5’调控区的序列比对 | 第50-55页 |
| ·FSHR 5’调控区-71 位点的多态性检测 | 第55-57页 |
| ·PCR 扩增 | 第55-56页 |
| ·多态性检测与测序 | 第56-57页 |
| ·FSHR 5’调控区-237 位点的多态性检测 | 第57-58页 |
| ·PCR 扩增 | 第57页 |
| ·多态性检测 | 第57-58页 |
| ·FSHR 5’调控区-868 位点200 BP 插入序列的多态性检测 | 第58页 |
| ·数据统计及遗传效应分析 | 第58-60页 |
| ·基因频率和基因型频率 | 第58-59页 |
| ·FSHR 5’调控区-71、-237 和-868 位点多态性与产蛋性能的关联分析 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| ·鸡FSHR 5’调控区序列分析 | 第60-61页 |
| ·三位点的等位基因分布 | 第61页 |
| ·FSHR 5’调控区多态性位点与产蛋性能的关系 | 第61-63页 |
| 试验二 鸡BMPR-ⅠB 外显子6-7 序列的克隆及其遗传效应分析 | 第63-73页 |
| 1 试验材料 | 第63页 |
| 2 试验方法 | 第63-65页 |
| ·鸡血液DNA 的提取 | 第63页 |
| ·PCR 扩增、测序和序列比对 | 第63页 |
| ·序列多态性分析 | 第63-64页 |
| ·BMPR-ⅠB 外显子6 上35 位点的 PCR 扩增 | 第64页 |
| ·PCR-SSCP 检测35 位点多态性 | 第64页 |
| ·PCR-RFLP 方法检测287 位 A/G 转换 | 第64页 |
| ·统计分析 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-71页 |
| ·鸡血中提取的基因组 DNA | 第65页 |
| ·BMPR-ⅠB 外显子6-7 序列克隆测序 | 第65-67页 |
| ·BMPR-ⅠB 外显子6-7 序列的扩增 | 第65-66页 |
| ·PCR 产物克隆测序 | 第66-67页 |
| ·BMPR-ⅠB 35 位点多态性检测 | 第67-69页 |
| ·PCR 扩增 | 第67-68页 |
| ·多态性检测 | 第68-69页 |
| ·BMPR-ⅠB 287 位点的 PCR-RFLP 检测 | 第69页 |
| ·数据统计和关联分析 | 第69-71页 |
| ·BMPR-ⅠB 35、287 位点基因型频率和等位基因频率 | 第69-70页 |
| ·BMPR-ⅠB 35、287 位点与产蛋性能的关联分析 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 试验三 鸡FSHR、BMPR-ⅠB 和IGFBP-4 MRNA 在卵巢组织和卵泡的表达 | 第73-80页 |
| 1 试验材料 | 第73页 |
| 2 试验方法 | 第73-74页 |
| ·总RNA 的提取 | 第73页 |
| ·半定量RT-PCR | 第73页 |
| ·统计分析 | 第73-74页 |
| 3 结果 | 第74-77页 |
| ·提取总RNA 的检测 | 第74-75页 |
| ·不同周龄鸡 FSHR MRNA 在卵巢、卵泡的表达变化 | 第75页 |
| ·不同周龄鸡 BMPR-ⅠB MRNA 在卵巢、卵泡的表达变化 | 第75-76页 |
| ·不同周龄鸡 IGFBP-4 MRNA 在卵巢、卵泡的表达变化 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| ·FSHR mRNA 表达与卵巢卵泡发育的关系 | 第77-78页 |
| ·BMPR- Ⅰ B mRNA 表达与卵巢卵泡发育的关系 | 第78页 |
| ·IGFBP-4 mRNA 表达与卵巢卵泡发育的关系 | 第78-80页 |
| 试验四 鸡卵巢组织不同时期差异表达基因的克隆 | 第80-95页 |
| 1 试验材料 | 第80页 |
| 2 试验方法 | 第80-83页 |
| ·总RNA 的提取 | 第80页 |
| ·DDRT-PCR | 第80-82页 |
| ·差异显示引物 | 第80页 |
| ·逆转录合成 cDNA 第一链 | 第80-81页 |
| ·DD-PCR | 第81页 |
| ·6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第81页 |
| ·差异片段的回收和二次扩增 | 第81-82页 |
| ·二次扩增差异片段的纯化、克隆和测序 | 第82页 |
| ·半定量RT-PCR | 第82页 |
| ·统计分析 | 第82-83页 |
| 3 结果 | 第83-90页 |
| ·提取总 RNA 的检测 | 第83页 |
| ·DDRT-PCR | 第83-84页 |
| ·差异表达片段的回收和二次扩增 | 第84页 |
| ·差异显示片段测序 | 第84页 |
| ·差异表达基因检索 | 第84-85页 |
| ·半定量RT-PCR 验证差异表达基因 | 第85-90页 |
| 4 讨论 | 第90-95页 |
| ·鸡基因组与差异表达基因的生物信息学分析 | 第90-91页 |
| ·鸡卵巢组织差异表达基因 | 第91-95页 |
| ·肿瘤蛋白D52 样蛋白2 | 第91-92页 |
| ·DNAJC8 | 第92-93页 |
| ·LDHB | 第93页 |
| ·其他基因 | 第93-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-107页 |
| 附录 | 第107-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
