| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| ·前言 | 第13页 |
| ·免疫学方法 | 第13-15页 |
| ·免疫荧光技术(Immuno F1uorescence Technique I，FT) | 第14页 |
| ·酶免疫测定技术(enzyme immunoassay，EIA) | 第14-15页 |
| ·分子生物学方法 | 第15-19页 |
| ·核酸探针技术 | 第15页 |
| ·PCR 技术 | 第15-18页 |
| ·PCR 产物的直接定量 | 第16页 |
| ·极限稀释法(又称终点稀释法) | 第16-17页 |
| ·非竞争性对照基因定量法 | 第17页 |
| ·竞争性PCR（competitive –PCR ,cPCR） | 第17-18页 |
| ·荧光实时定量PCR(FQ - PCR) | 第18页 |
| ·基因芯片技术 | 第18-19页 |
| ·综合法 | 第19-22页 |
| ·PCR-ELISA 法 | 第19-20页 |
| ·定量免疫捕获PCR | 第20-22页 |
| 第二章 特异性定量引物的设计及序列测定 | 第22-35页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·特异性引物的设计 | 第22-25页 |
| ·DNA 提取 | 第25-26页 |
| ·PCR 反应条件的优化 | 第26-27页 |
| ·复性温度梯度实验 | 第26页 |
| ·Mg~(2+)浓度梯度优化实验 | 第26-27页 |
| ·检测引物特异性实验 | 第27页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第27-28页 |
| ·克隆 | 第28-29页 |
| ·载体连接 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第28-29页 |
| ·PCR 检测 | 第29页 |
| ·测序 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-33页 |
| ·特异性引物 | 第30页 |
| ·DNA 提取 | 第30页 |
| ·PCR 反应条件的优化结果 | 第30-32页 |
| ·复性温度梯度实验 | 第30-31页 |
| ·Mg~(2+)浓度梯度实验 | 第31页 |
| ·检测引物特异性实验 | 第31-32页 |
| ·克隆检验 | 第32页 |
| ·测序结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 内标的设计与制备 | 第35-44页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-40页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·内标设计 | 第35-36页 |
| ·质粒提取 | 第36页 |
| ·内标制备 | 第36-40页 |
| ·双酶切 | 第36-37页 |
| ·胶回收 | 第37-38页 |
| ·补平并连接 | 第38页 |
| ·PCR 检测 | 第38-39页 |
| ·克隆 | 第39页 |
| ·单酶切 | 第39-40页 |
| ·内标定量 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·质粒提取 | 第40页 |
| ·双酶切 | 第40-41页 |
| ·连接产物PCR 结果 | 第41页 |
| ·克隆检验 | 第41-42页 |
| ·内标制备 | 第42页 |
| ·内标定量 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 竞争PCR 方法的建立 | 第44-53页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-48页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·细菌计数 | 第45-46页 |
| ·平板计数法计数 | 第45页 |
| ·吖啶橙荧光显微镜计数法计总菌数 | 第45-46页 |
| ·萘啶酮酸活菌直接镜检法计活菌数 | 第46页 |
| ·竞争PCR | 第46-48页 |
| ·两种不同DNA 提取方法提取的菌株Y DNA 与内标PCR 实验 | 第46-47页 |
| ·竞争PCR 反应 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-51页 |
| ·细菌计数 | 第48-49页 |
| ·平板计数 | 第48页 |
| ·吖啶橙荧光显微镜计数法计总菌数 | 第48页 |
| ·萘啶酮酸活菌直接镜检法计活菌数 | 第48-49页 |
| ·竞争PCR | 第49-51页 |
| ·两种不同DNA 提取方法提取菌株Y 的DNA 与内标PCR 实验结果 | 第49页 |
| ·菌株J_3 竞争PCR 结果 | 第49-50页 |
| ·菌株Y 竞争PCR 结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 应用竞争PCR 方法定量检测环境中的生物修复作用菌 | 第53-62页 |
| ·前言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-57页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·提取泥土样品DNA | 第54-55页 |
| ·纯化DNA | 第55-56页 |
| ·用PVPP 和Sephacryl S-400 High Resolution 纯化DNA | 第55页 |
| ·特异性引物的PCR 反应 | 第55-56页 |
| ·竞争PCR | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-60页 |
| ·从泥土中提取DNA | 第57页 |
| ·DNA 纯化 | 第57-59页 |
| ·DNA 纯化结果 | 第57-58页 |
| ·特异性引物PCR 结果 | 第58-59页 |
| ·竞争PCR | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
