中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
符号说明 | 第11-12页 |
第一部分 文献综述 | 第12-23页 |
1. 植物的双受精作用 | 第12-13页 |
2. LRR/EXTENSINS 蛋白的研究 | 第13-22页 |
·LRX 蛋白的结构与功能 | 第13-19页 |
·LRR/EXTENSINS 在拟南芥中的研究 | 第19-21页 |
·LRX 蛋白功能的研究 | 第21-22页 |
3. 小结 | 第22页 |
4. 本研究所采取的技术路线 | 第22-23页 |
第二部分:实验论文 | 第23-54页 |
一、实验材料 | 第23-28页 |
1. 植物材料 | 第23页 |
2. 菌株和质粒 | 第23页 |
3. 试剂和培养基 | 第23-27页 |
4. 引物序列 | 第27-28页 |
二、实验方法 | 第28-39页 |
1. ATPEX2 组织定位及其过量表达 | 第28-36页 |
·拟南芥基因组DNA 的提取 | 第28-29页 |
·拟南芥总RNA 的提取 | 第29页 |
·PCR 扩增PEX2 基因全长片段及其启动子 | 第29-30页 |
·PCR 产物回收 | 第30页 |
·连接 | 第30页 |
·大肠杆菌DH5Α感受态的制备及转化 | 第30-31页 |
·质粒的提取 | 第31-32页 |
·质粒DNA 的纯化 | 第32页 |
·质粒的双酶切及电泳 | 第32页 |
·DNA 片段的回收和纯化 | 第32-33页 |
·表达载体的构建 | 第33页 |
·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第33页 |
·农杆菌质粒的提取与鉴定 | 第33页 |
·渗透法转化拟南芥 | 第33-34页 |
·转化子的筛选 | 第34页 |
·转基因植株的PCR 检测 | 第34页 |
·提取拟南芥各组织RNA 作NORTHERN 杂交 | 第34-36页 |
·组织化学法检测GUS 基因的表达 | 第36页 |
2. 突变体纯合子的鉴定 | 第36-39页 |
·CTAB 法微量提取DNA | 第36-37页 |
·突变体纯合子的PCR 鉴定 | 第37-39页 |
三、结果分析 | 第39-51页 |
1. ATPEX2 基因的表达 | 第39-45页 |
·ATPEX2 启动子克隆 | 第39-41页 |
·启动子片段的获得 | 第41页 |
·启动子表达载体的构建 | 第41-42页 |
·农杆菌转化 | 第42页 |
·转基因拟南芥植株的PCR 初步检测 | 第42-43页 |
·转基因拟南芥GUS 染色分析 | 第43-44页 |
·野生型植株根、茎、叶、花、果实等组织的NORTHERN 杂交鉴定 | 第44-45页 |
2. PEX2 基因功能的研究 | 第45-51页 |
·序列分析 | 第45-47页 |
·目的片段的扩增 | 第47页 |
·PEX2 基因过量表达载体构建 | 第47-48页 |
·植物表达载体的构建 | 第48-49页 |
·转基因植株的 PCR 初步鉴定 | 第49页 |
·拟南芥 SALK T-DNA 插入突变体的检测 | 第49-51页 |
四、讨论 | 第51-53页 |
五、结论 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-62页 |
附录 | 第62-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
硕士期间发表的毕业论文 | 第65页 |