| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 酸性蛋白酶的研究进展 | 第10-20页 |
| ·酸性蛋白酶的种类 | 第10页 |
| ·酸性蛋白酶的来源 | 第10页 |
| ·酸性蛋白酶的性质 | 第10-12页 |
| ·最适作用pH 和pH 稳定性 | 第10-11页 |
| ·最适作用温度和温度稳定性 | 第11页 |
| ·抑制剂 | 第11页 |
| ·金属离子对酸性蛋白酶的影响 | 第11-12页 |
| ·酸性蛋白酶的作用底物 | 第12页 |
| ·酸性蛋白酶的催化机制 | 第12-13页 |
| ·酸性蛋白酶基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| ·国内酸性蛋白酶基因工程研究 | 第13-14页 |
| ·国外酸性蛋白酶基因工程研究 | 第14-15页 |
| ·酸性蛋白酶的应用 | 第15-18页 |
| ·作为饲料添加剂在畜牧业中的应用 | 第16-17页 |
| ·在乳品工业上的应用 | 第17页 |
| ·在酒精生产中的应用 | 第17-18页 |
| ·在皮革工业上的应用 | 第18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 猪胃蛋白酶原A 基因CDNA 的克隆 | 第20-29页 |
| ·材料和方法 | 第20-24页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·生化试剂与分子生物学试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第20-21页 |
| ·胃蛋白酶原A 基因PCR 扩增引物的设计 | 第21页 |
| ·TRIzol 法提取胃腺细胞总RNA | 第21页 |
| ·胃蛋白酶原A cDNA 合成及克隆（RT-PCR） | 第21-22页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第22页 |
| ·PCR产物连接和转化测序 | 第22-23页 |
| ·PCR法筛选鉴定重组质粒转化成功的克隆菌 | 第23-24页 |
| ·序列分析 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 猪胃蛋白酶原基因在毕赤酵母胞内表达及其培养条件的优化 | 第29-45页 |
| ·材料和方法 | 第29-37页 |
| ·菌株、质粒、基因 | 第29页 |
| ·工具酶及其他试剂 | 第29页 |
| ·试验仪器 | 第29页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第29-31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·PCR 产物的酶切及回收 | 第31页 |
| ·酵母表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第32页 |
| ·重组载体转化毕赤酵母 | 第32-33页 |
| ·高表达菌株的筛选 | 第33页 |
| ·破碎方法 | 第33页 |
| ·重组酵母基因组PCR 分析 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第34页 |
| ·蛋白质印迹杂交WB | 第34-35页 |
| ·酵母细胞光密度OD600的测定 | 第35页 |
| ·Bradford 总蛋白含量测定 | 第35-36页 |
| ·重组胃蛋白酶酶活力的测定方法 | 第36-37页 |
| ·培养条件优化 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-43页 |
| ·酵母表达载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·酵母的电转化和筛选 | 第38页 |
| ·Bradford 标准曲线及蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| ·酶活力标准曲线 | 第39-40页 |
| ·重组酵母培养表达条件的优化 | 第40-42页 |
| ·重组酵母胞内表达胃蛋白酶原SDS-PAGE | 第42-43页 |
| ·重组胃蛋白酶WB | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·重组酵母筛选 | 第43页 |
| ·重组酵母培养条件的优化 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第四章 猪胃蛋白酶原A 基因稀有密码子的优化 | 第45-50页 |
| ·材料与方法 | 第45-46页 |
| ·菌株、质粒、基因 | 第45页 |
| ·工具酶与生化试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第45页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·突变的步骤方法 | 第45-46页 |
| ·PCR 产物纯化回收、连接和转化测序 | 第46页 |
| ·序列分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-48页 |
| ·胃蛋白酶原A 基因改造设计 | 第46-48页 |
| ·基因合成 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 缩略词 | 第56-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |