| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 1 引言 | 第7-11页 |
| ·奶牛乳房炎概况 | 第7页 |
| ·奶牛乳房炎病原微生物 | 第7-8页 |
| ·奶牛链球菌性乳房炎乳研究进展 | 第8页 |
| ·停乳链球菌概述 | 第8-9页 |
| ·停乳链球菌毒力因子 | 第9页 |
| ·链球菌性乳房炎的防治 | 第9页 |
| ·链球菌疫苗研究进展 | 第9-10页 |
| ·本研究的意义和主要研究内容 | 第10-11页 |
| 2 实验一 停乳链球菌 MIG 基因的克隆 | 第11-25页 |
| ·材料与方法 | 第11-14页 |
| ·材料 | 第11-13页 |
| ·实验方法 | 第13-14页 |
| ·克隆载体的构建 | 第14-16页 |
| ·MIG 的 PCR 扩增 | 第14-15页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第15-16页 |
| ·MIG 基因片段的回收与纯化 | 第16页 |
| ·质粒 pMD19T-MIG 的构建 | 第16-19页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备(采用 CaCl2 法) | 第16-17页 |
| ·与 T 载体的连接 | 第17页 |
| ·连接产物的转化 | 第17-18页 |
| ·质粒的提取 | 第18页 |
| ·质粒的双酶切鉴定 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的序列测定及分析 | 第19页 |
| ·结果 | 第19-25页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第19-20页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·MIG 的序列测定及相关分析 | 第21-25页 |
| ·结果分析 | 第25页 |
| 3 实验二 MIG 基因的原核表达质粒的构建和表达 | 第25-34页 |
| ·材料与方法 | 第25-31页 |
| ·材料 | 第25-28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·重组表达质粒 pET32a-MIG 的构建 | 第28-30页 |
| ·目的蛋白表达的最佳诱导条件的确定及可溶性鉴定 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·测序结果 | 第32页 |
| ·可溶性鉴定及最佳诱导时间的确定 | 第32-33页 |
| ·结果分析 | 第33-34页 |
| ·减少包涵体的形成 | 第33-34页 |
| ·本实验最佳裂解方法的确定 | 第34页 |
| 4 实验三重组蛋白的纯化及免疫试验研究 | 第34-44页 |
| ·材料与方法 | 第34-39页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第40-41页 |
| ·透析及浓缩 | 第41页 |
| ·血清抗体滴度监测 | 第41-43页 |
| ·玻片凝集反应结果 | 第43页 |
| ·结果分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白的纯化及透析 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第44页 |
| ·抗体水平检测 | 第44页 |
| 5 讨论 | 第44-48页 |
| ·基因工程亚单位疫苗抗原的选择 | 第44-45页 |
| ·停乳链球菌 MIG 基因克隆和表达 | 第45-46页 |
| ·免疫 | 第46页 |
| ·停乳链球菌蛋白受体 | 第46-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |