| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·A 群链球菌致病性及其表面的纤溶酶原受体 | 第10-13页 |
| ·A 群链球菌及其致病因子 | 第10-11页 |
| ·纤溶酶原的结构和功能 | 第11-12页 |
| ·A 群链球菌的纤溶酶原受体 | 第12页 |
| ·Plg 激活剂和抑制剂 | 第12-13页 |
| ·GAS 利用Plg 感染的机制 | 第13页 |
| ·脂蛋白(a)[Lp(a)] | 第13-14页 |
| ·Lp(a)的结构和代谢 | 第13-14页 |
| ·Lp(a)的生理功能 | 第14页 |
| ·Lp(a)的致病性 | 第14页 |
| ·立题依据 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16-20页 |
| ·质粒和菌株 | 第16页 |
| ·试剂盒和标准品 | 第16-17页 |
| ·化学试剂 | 第17-18页 |
| ·填料及纯化缓冲液 | 第18页 |
| ·化学贮存液的配制 | 第18-20页 |
| ·PCR 引物 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-30页 |
| ·A 群链球菌CMCC32175 基因组DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| ·M6 表面GAPDH 及GAPDHΔ345 基因的扩增 | 第22页 |
| ·GAPDH 及 GAPDHΔ345 基因扩增产物的纯化 | 第22-23页 |
| ·GAPDH 及rGAPDHΔ345 基因及载体片断的酶切及纯化 | 第23-24页 |
| ·酶切 GAPDH 及 GAPDHΔ345 基因片段与pASK-IBA37 载体的连接 | 第24页 |
| ·pASK-IBA37-GAPDH 转化感受态E.coli JM109 | 第24-27页 |
| ·pASK-IBA37-GAPDH 重组质粒转化E.coli BL21 | 第27页 |
| ·pASK-IBA37- GAPDHΔ345 重组质粒转化感受态E.coli BL21 | 第27页 |
| ·菌落PCR 鉴定转化阳性的菌落 | 第27页 |
| ·基因序列测定 | 第27页 |
| ·工程菌培养 | 第27-28页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第28页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 的纯化 | 第28-29页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 的质谱鉴定 | 第29页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 切除 N-末端His-tag | 第29页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 浓度的测定 | 第29页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 活性的测定 | 第29-30页 |
| ·酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测 rGAPDH 及 rGAPDHΔ345 与蛋白 Plg、Lp(a) 和 LDL 的结合实验 | 第30-31页 |
| ·ELISA 检测rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与 Plg 的结合实验 | 第30页 |
| ·ELISA 检测rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与 Lp(a)的结合实验 | 第30-31页 |
| ·ELISA 检测rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与 LDL 的结合实验 | 第31页 |
| ·ELISA 检测 EACA 抑制 rGAPDH 及 rGAPDHΔ345 与 Plg、Lp(a)的结合实验 | 第31-32页 |
| ·ELISA 检测 EACA 抑制rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与 Plg 的结合实验 | 第31-32页 |
| ·ELISA 检测 EACA 抑制rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与 Lp(a)的结合实验 | 第32页 |
| ·ELISA 检测 Lp(a)抑制rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与Plg 的结合实验 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-43页 |
| ·A 群链球菌 CMCC32175 基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·GAPDH 及 GAPDHΔ345 目的基因的扩增结果 | 第33-34页 |
| ·GAPDH 目的基因的扩增结果 | 第33页 |
| ·GAPDHΔ345 目的基因的扩增结果 | 第33-34页 |
| ·GAPDH 基因的酶切、连接和转化结果的鉴定 | 第34-35页 |
| ·GAPDHΔ345 基因的酶切、连接和转化结果的鉴定 | 第35页 |
| ·GAPDH 及 GAPDHΔ345 序列测定结果 | 第35页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 的表达 | 第35-37页 |
| ·rGAPDH 蛋白的表达 | 第35-36页 |
| ·rGAPDHΔ345 蛋白的表达 | 第36-37页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 的纯化 | 第37-38页 |
| ·rGAPDH 的纯化结果 | 第37页 |
| ·rGAPDHΔ345 的纯化结果 | 第37-38页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 质谱分析结果 | 第38页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 切除 N-末端His-tag 结果 | 第38-39页 |
| ·rGAPDH 切除N-末端 His-tag 结果 | 第38页 |
| ·rGAPDHΔ345 切除N-末端 His-tag 结果 | 第38-39页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 含量的测定 | 第39-40页 |
| ·rGAPDH 及rGAPDHΔ345 活性的测定 | 第40页 |
| ·ELISA 检测rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与蛋白Plg L、p(a)和 LDL 的结合实验结果 | 第40-41页 |
| ·ELISA 检测rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与Plg 的结合实验结果 | 第40-41页 |
| ·ELISA 检测rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与Lp(a)和 LDL 的结合实验结果 | 第41页 |
| ·ELISA 检测EACA 抑制rGAPDH及rGAPDHΔ345与蛋白Plg和Lp(a)的结合实验结果 | 第41-42页 |
| ·ELISA 检测EACA 抑制rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与蛋白 Plg 的结合实验结果 | 第41-42页 |
| ·ELISA检测EACA抑制rGAPDH及rGAPDHΔ345与蛋白Lp(a)的结合实验结果 | 第42页 |
| ·ELISA 检测Lp(a)抑制rGAPDH 及rGAPDHΔ345 与 Plg 的结合实验结果 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 6 本论文的创新之处 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录 | 第50-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
