| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 猪胆囊收缩素—33(CCK33)基因的克隆及其四串联体的构建 | 第13-32页 |
| 1.材料和方法 | 第13-25页 |
| ·材料 | 第13-16页 |
| ·组织来源、菌种、质粒 | 第13页 |
| ·酶制剂 | 第13-14页 |
| ·试剂盒 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·引物及测序 | 第16页 |
| ·实验仪器设备 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-25页 |
| ·猪十二指肠组织总RNA的提取 | 第16-17页 |
| ·胆囊收缩素cDNA的制备 | 第17-18页 |
| ·猪胆囊收缩素—33(CCK33)基因的克隆 | 第18-20页 |
| ·CCK33四串联体的构建 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET28a—4CCK33质粒的构建 | 第21-23页 |
| ·重组质粒的转化 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆转化子的筛选及验证 | 第24-25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| ·猪胆囊收缩素CCK33基因的克隆 | 第25页 |
| ·猪十二指肠肠粘膜组织中RNA的提取 | 第25页 |
| ·猪胆囊收缩素CCK33基因的克隆 | 第25页 |
| ·TA克隆阳性重组子的鉴定 | 第25-26页 |
| ·CCK33四串联体的构建 | 第26-28页 |
| ·二串联体的构建 | 第26-27页 |
| ·四串联体的构建 | 第27-28页 |
| ·CCK33四串联体原核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-32页 |
| ·动物组织RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·串联体的构建 | 第30-32页 |
| 第二章 CCK33四串联体蛋白的表达纯化、抗体的制备及免疫原性检测 | 第32-55页 |
| 1.材料和方法 | 第32-43页 |
| ·材料 | 第32-37页 |
| ·菌种、质粒 | 第32页 |
| ·动物 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32-36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·实验仪器与设备 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-43页 |
| ·pET28a—4CCK33重组蛋白的表达 | 第37页 |
| ·小肽SDS—PAGE凝胶电泳分析 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40-42页 |
| ·western杂交 | 第42-43页 |
| ·CCK33四串联体蛋白免疫原性的检测 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-50页 |
| ·CCK33重组蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·CCK33重组蛋白可溶性分析 | 第44-45页 |
| ·CCK33重组蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·纯化后蛋白浓度的测定 | 第47-48页 |
| ·抗体效价的检测 | 第48页 |
| ·western blot分析 | 第48-49页 |
| ·CCK33四串联体蛋白免疫原性的检测 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-55页 |
| ·诱导条件的优化 | 第50-51页 |
| ·纯化方法的选取 | 第51-52页 |
| ·低分子量蛋白的SDS—PAGE凝胶电泳 | 第52-53页 |
| ·CCK抗体的作用 | 第53-55页 |
| 第三章 PGEX—CCK33表达载体的构建以及重组蛋白的表达纯化 | 第55-67页 |
| 1.材料和方法 | 第55-60页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·菌种、质粒 | 第55页 |
| ·酶制剂、试剂盒 | 第55-56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·实验仪器与设备 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·pGEX—CCK33表达载体的构建 | 第57页 |
| ·pET28a—4CCK33重组蛋白的表达 | 第57-58页 |
| ·SDS—PAGE凝胶电泳分析 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 2.结果 | 第60-65页 |
| ·pGEX—CCK33表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·CCK33基因的扩增 | 第60-61页 |
| ·pGEX—CCK33质粒的构建 | 第61页 |
| ·GST—CCK33蛋白的表达 | 第61-62页 |
| ·GST—CCK33蛋白的定位 | 第62-63页 |
| ·GST—CCK33蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| ·间接ELISA法鉴定GST—CCK33蛋白的与抗体的结合性 | 第64-65页 |
| 3.讨论 | 第65-67页 |
| ·pGEX—4t—1载体的选择 | 第65-66页 |
| ·目的蛋白诱导条件的优化及纯化 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 综述 | 第74-89页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
