| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| ·拟南芥 | 第10-11页 |
| ·拟南芥的生物学特性 | 第10-11页 |
| ·拟南芥的遗传学特性 | 第11页 |
| ·活性氧 | 第11-13页 |
| ·激活标签法 | 第13-16页 |
| ·激活标签法的载体 | 第14-15页 |
| ·获得T-DNA插入位点侧翼序列的方法 | 第15页 |
| ·激活标签法在植物功能基因组学研究中的应用及研究进展 | 第15-16页 |
| ·研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| ·研究路线 | 第17-18页 |
| 第二章 拟南芥氧化胁迫敏感突变体的筛选和基因定位 | 第18-33页 |
| 引言 | 第18页 |
| ·材料和方法 | 第18-27页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·拟南芥激活标签突变体库的构建 | 第19-20页 |
| ·H_2O_2敏感突变体的筛选流程 | 第20-21页 |
| ·拟南芥对H_2O_2的耐受性分析 | 第21页 |
| ·H_2O_2敏感突变体的初筛 | 第21页 |
| ·H_2O_2敏感突变体的复筛 | 第21页 |
| ·拟南芥基因组DNA提取 | 第21-22页 |
| ·TAIL-PCR分离T-DNA侧翼序列 | 第22-23页 |
| ·Tail-PCR特异产物回收 | 第23-25页 |
| ·目的片段连接pMD18-T Vector | 第25页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第25页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·序列比对 | 第26页 |
| ·T-DNA插入位点验证及纯合体的筛选 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·拟南芥激活标签突变体库的构建 | 第27页 |
| ·H_2O_2对拟南芥的胁迫分析 | 第27-28页 |
| ·H_2O_2敏感突变体的初筛 | 第28页 |
| ·H_2O_2敏感突变体的复筛 | 第28-29页 |
| ·H_2O_2敏感突变体的表型再确认 | 第29-30页 |
| ·H_2O_2敏感突变体突变基因的分离 | 第30页 |
| ·目的片段转化DH5α大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| ·H_2O_2敏感突变体突变基因的定位 | 第30页 |
| ·H_2O_2敏感突变体插入位点验证和纯合体的筛选 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 拟南芥ICE1突变体的鉴定和植物表达载体的构建和遗传转化 | 第33-43页 |
| 引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·植物材料、种子、菌种和质粒 | 第33页 |
| ·试剂盒和试剂 | 第33页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取及cDNA的获得 | 第33-34页 |
| ·ICE1 T-DNA插入突变体的纯合体鉴定 | 第34页 |
| ·拟南芥ICE1基因的克隆 | 第34页 |
| ·拟南芥ICE1-promotor的克隆 | 第34-35页 |
| ·植物表达载体pEGAD-ICE1的构建 | 第35页 |
| ·植物表达载体pEGAD-P_(ICE1)::ICE1的构建 | 第35页 |
| ·重组表达载体转化根癌农杆菌 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌介导的植物遗传转化及筛选阳性转基因苗 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-41页 |
| ·ICE突变体的鉴定 | 第36页 |
| ·ICE1基因片段的克隆 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体pEGAD-ICE1的构建 | 第37-38页 |
| ·拟南芥ICE1-promotor的克隆 | 第38-39页 |
| ·植物表达载体pEGAD-P_(ICE1)::CE1的构建 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌及菌株的检测 | 第40页 |
| ·转基因植株的抗性筛选及PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 拟南芥NAC1和SIP1双基因反义表达载体的构建及遗传转化 | 第43-54页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| ·材料与方法 | 第44-47页 |
| ·植物材料、菌种和质粒 | 第44页 |
| ·试剂盒和试剂 | 第44页 |
| ·拟南芥叶片总DNA提取及cDNA的获得 | 第44页 |
| ·NOS-CaMV35S基因片段的克隆 | 第44页 |
| ·植物表达载体pFGC5941的改造(pFGC5941S)的构建 | 第44-45页 |
| ·拟南芥NAC1基因正义、反义片段的克隆 | 第45页 |
| ·拟南芥NAC1基因正义、反义中间表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·拟南芥SIP1基因的克隆 | 第46页 |
| ·拟南芥NAC1正义、反义基因和SIP1基因共表达载体的构建 | 第46页 |
| ·重组表达载体转化根癌农杆菌 | 第46页 |
| ·根癌农杆菌介导的植物遗传转化及筛选阳性转基因苗 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-53页 |
| ·NOS-CaMV35S基因片段的克隆 | 第47页 |
| ·植物表达载体pFGC5941的改造 | 第47-48页 |
| ·拟南芥NAC1基因正义、反义片段的克隆 | 第48-49页 |
| ·拟南芥NAC1基因正义、反义中间载体的构建 | 第49-50页 |
| ·拟南芥SIP1基因的克隆 | 第50页 |
| ·拟南芥NAC1正义、反义基因和SIP1基因共表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌及菌株的检测 | 第51-52页 |
| ·转基因植株的抗性筛选及PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 总结及下一步工作计划 | 第54-55页 |
| ·总结 | 第54页 |
| ·下一步工作计划 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
