农杆菌介导的高油酸大豆遗传转化方法的建立
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 引言 | 第8-15页 |
| 1. 大豆基因工程品质育种研究的概况 | 第8-9页 |
| 2. 大豆高油酸基因工程育种研究进展 | 第9-10页 |
| 3. 农杆菌介导大豆的遗传转化研究进展 | 第10-12页 |
| ·大豆遗传转化的现状 | 第10页 |
| ·农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第10-11页 |
| ·农杆菌介导的大豆转化系统概述 | 第11-12页 |
| ·子叶节转化系统 | 第11页 |
| ·大豆胚尖转化系统 | 第11页 |
| ·大豆茎尖转化系统 | 第11-12页 |
| 4. 农杆菌介导的大豆遗传转化的限制性因素 | 第12-13页 |
| ·大豆基因型 | 第12页 |
| ·农杆菌菌株 | 第12页 |
| ·不同受体材料 | 第12页 |
| ·其它因素 | 第12-13页 |
| 5. 研究的目的意义、原理、主要内容 | 第13-15页 |
| ·实验的目的意义 | 第13页 |
| ·技术原理 | 第13-14页 |
| ·实验的主要内容 | 第14-15页 |
| 材料和方法 | 第15-21页 |
| 1. 材料 | 第15-16页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·试剂盒、酶类、PCR 引物 | 第15页 |
| ·培养基和试剂 | 第15-16页 |
| 2. 实验方法 | 第16-21页 |
| ·农杆菌的检测和转化 | 第16-17页 |
| ·农杆菌电转化感受态的制作 | 第16页 |
| ·农杆菌热转化感受态的制作 | 第16页 |
| ·三亲杂交法转化农杆菌 | 第16-17页 |
| ·直接转化法 | 第16-17页 |
| ·滤膜固定法 | 第17页 |
| ·农杆菌质粒的提取 | 第17页 |
| ·酶切鉴定 | 第17页 |
| ·大豆种子的消毒方法 | 第17页 |
| ·子叶节转化系统 | 第17-18页 |
| ·胚尖转化系统 | 第18-19页 |
| ·茎尖转化系统 | 第19页 |
| ·转基因大豆的检测 | 第19-21页 |
| ·T0 代种子的抗性生根培养 | 第19页 |
| ·再生植株的PCR 检测 | 第19-20页 |
| ·子代种子油酸含量测定 | 第20-21页 |
| 结果与分析 | 第21-30页 |
| 1 pSBHO-3 在农杆菌中的表达的鉴定 | 第21-22页 |
| 2. 大豆遗传转化系统的技术路线 | 第22-27页 |
| ·影响农杆菌转化的因素 | 第22-24页 |
| ·大豆基因型的筛选 | 第22-23页 |
| ·抗生素的敏感性 | 第23页 |
| ·共培养时间 | 第23-24页 |
| ·子叶节转化系统建立技术路线 | 第24页 |
| ·胚尖转化系统的建立与优化 | 第24-25页 |
| ·茎尖转化系统的建立与优化 | 第25-27页 |
| ·子叶节和胚尖转化方法转化效率之比较 | 第27页 |
| 3. 转基因材料的筛选 | 第27-30页 |
| ·抗性发芽实验 | 第27页 |
| ·PCR 检测 | 第27-29页 |
| ·T0 代材料的PCR 检测结果 | 第27-28页 |
| ·T1 代材料叶子PCR 检测结果 | 第28页 |
| ·T1 代材料种子PCR 检测结果 | 第28-29页 |
| ·油酸检测 | 第29-30页 |
| 讨论 | 第30-33页 |
| 1. hpRNA 介导的基因沉默 | 第30页 |
| 2. 大豆子叶节转化系统的讨论 | 第30-31页 |
| 3. 胚尖转化系统的讨论 | 第31页 |
| 4. 茎尖转化系统讨论 | 第31-32页 |
| 5. 三种转化方法的比较 | 第32-33页 |
| 结 论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-39页 |
| 致谢 | 第39页 |
