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孕酮对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响

1 引言第1-14页
   ·防御素的分类第7页
   ·β–防御素的分布第7-8页
   ·β–防御素的结构特征第8-9页
   ·β-防御素的生物学活性及应用前景第9-11页
     ·β- 防御素的生物学活性第9页
     ·抗菌活性第9-10页
     ·抗病毒作用第10页
     ·细胞毒性第10页
     ·免疫活性第10-11页
   ·β-防御素的作用机理第11页
     ·β-防御素抗菌作用机理第11页
     ·β-防御素抗病毒作用机理第11页
   ·β- 防御素的应用第11-13页
     ·解决细菌耐药问题第11-12页
     ·在抗肿瘤方面的应用第12页
     ·用于调动机体适应性免疫第12页
     ·治疗肺部感染第12页
     ·治疗胃肠疾病第12-13页
     ·治疗其它疾病第13页
   ·防御素的表达调节第13页
   ·孕酮对雌性生殖道的作用第13-14页
     ·孕激素第13-14页
       ·来源与种类第13页
       ·生理作用第13-14页
       ·临床应用第14页
     ·孕酮对雌性生殖道的作用第14页
   ·结束语第14页
2. 材料和方法第14-20页
   ·材料第14-15页
     ·实验材料第14-15页
     ·仪器设备第15页
     ·试验药品第15页
   ·方法第15-20页
     ·输卵管上皮细胞培养方法的建立第15-17页
       ·输卵管上皮细胞原代培养第15页
       ·传代培养第15-16页
       ·染色体核型分析第16页
       ·免疫组化法鉴定第16-17页
         ·组织切片免疫组化第16页
         ·免疫组化法鉴定培养的输卵管上皮细胞第16-17页
     ·不同浓度的孕酮对上皮细胞β-防御素产生量的影响第17页
     ·培养的输卵管上皮细胞的总RNA 提取及检测第17-18页
       ·培养的输卵管上皮细胞的总 RNA 提取第17-18页
       ·绵羊输卵管上皮组织及培养细胞总 RNA 的检测第18页
     ·半定量RT-PCR 方法检测孕酮对β-防御素表达量的影响第18-20页
       ·引物设计与合成第18页
         ·β-防御素引物序列为第18页
         ·β-肌动蛋白引物序列为第18页
       ·RT—PCR 反应(两步法)第18-20页
         ·RT 反应体系为第18-19页
         ·PCR反应第19-20页
       ·半定量PCR反应中Mg~(2+)浓度的选择第20页
       ·半定量PCR反应中循环数的选择第20页
       ·防御素基因与内参基因(β-肌动蛋白基因)的竞争性RT-PCR第20页
3 结果第20-31页
   ·培养细胞的形态第20-24页
     ·从输卵管上皮分离并经过胶原酶消化、洗涤后准备培养的细胞形态.第20-21页
     ·培养48 小时的细胞形态第21页
     ·培养72 小时的细胞形态第21-22页
     ·培养120 小时的细胞形态第22-23页
     ·培养168 小时的细胞形态第23页
     ·传代培养细胞形态第23-24页
   ·染色体核型分析第24-25页
   ·免疫组化第25-27页
     ·输卵管切片角蛋白免疫组化染色结果第25页
     ·培养的输卵管上皮细胞免疫组化染色结果第25-27页
   ·半定量 RT-PCR 检测结果第27-31页
     ·加入不同浓度的孕酮后培养的细胞总 RNA 提取结果第27页
     ·半定量PCR反应中Mg2+浓度的选择第27-28页
     ·半定量PCR反应中循环数的选择第28页
     ·不同浓度的孕酮对上皮细胞β-防御素和β-肌动蛋白表达量的影响第28-31页
4 讨论第31-35页
   ·细胞培养第31-33页
   ·半定量 RT-PCR第33页
   ·孕酮对输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响第33-35页
5 结论第35-36页
致谢第36-37页
参考文献第37-42页
作者简介第42页

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