| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第12-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-55页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第14页 |
| ·PRRS的危害及流行病学特点 | 第14-16页 |
| ·PRRSV病原特性 | 第16-21页 |
| ·PRRSV的分类 | 第16页 |
| ·PRRSV的理化学特性 | 第16-17页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第17页 |
| ·PRRSV的细胞增殖特性 | 第17-18页 |
| ·PRRSV的致病机理及生物学特性 | 第18-21页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第21-34页 |
| ·PRRSV基因组的结构与功能 | 第21-23页 |
| ·PRRSV的蛋白质 | 第23-29页 |
| ·PRRSV的基因组变异和RNA重组 | 第29-31页 |
| ·PRRSV的抗原性变异 | 第31-32页 |
| ·PRRSV的毒力变异 | 第32页 |
| ·PRRSV的准种 | 第32-33页 |
| ·PRRSV的单克隆抗体 | 第33-34页 |
| ·PRRSV的免疫学反应 | 第34-40页 |
| ·抗PRRSV的体液免疫反应 | 第35-37页 |
| ·抗PRRSV的细胞免疫反应 | 第37-39页 |
| ·PRRSV与免疫抑制 | 第39-40页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第40-46页 |
| ·PRRS传统常规疫苗 | 第40-42页 |
| ·PRRS新型疫苗研究进展 | 第42-46页 |
| ·免疫佐剂简介 | 第46-48页 |
| ·免疫佐剂应用的优点 | 第47页 |
| ·免疫佐剂的分类及其作用机理 | 第47-48页 |
| ·蛋白转导 | 第48-55页 |
| ·蛋白转导的发现 | 第48-50页 |
| ·PTD结构组成特点 | 第50-51页 |
| ·VP22 PTD作用特点 | 第51-52页 |
| ·VP22 PTD作用机理 | 第52-53页 |
| ·VP22蛋白转导的应用前景 | 第53-55页 |
| 第2章 研究的目的与意义 | 第55-56页 |
| 第3章 材料与方法 | 第56-79页 |
| ·试验材料 | 第56-65页 |
| ·毒株、细胞与菌株 | 第56页 |
| ·载体与质粒 | 第56-58页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第58-59页 |
| ·本研究中所用的PCR引物 | 第59-60页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第60页 |
| ·免疫反应试验所用抗原及血清 | 第60页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第60-64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第64-65页 |
| ·试验方法 | 第65-79页 |
| ·目的外源基因的PCR扩增 | 第65页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第65页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第65页 |
| ·线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第65-66页 |
| ·质粒DNA片段的3′凹端补平 | 第66页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第66页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第66-67页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第67页 |
| ·连接产物的转化 | 第67-68页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第68-69页 |
| ·伪狂犬病毒(PRV)基因组DNA的提取 | 第69-70页 |
| ·脂质体共转染法 | 第70-71页 |
| ·重组病毒的蚀斑纯化 | 第71-72页 |
| ·PCR检测目的外源基因在重组病毒中的整合 | 第72页 |
| ·Southern blot印迹分析 | 第72-73页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第73页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第73-74页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的体外表达 | 第74-75页 |
| ·间接ELISA试验 | 第75-76页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第76页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第76-77页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第77页 |
| ·动物试验 | 第77-78页 |
| ·统计学方法 | 第78-79页 |
| 第4章 结果与分析 | 第79-107页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂rPRV的构建及实验免疫研究 | 第79-97页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂rPRV的构建流程 | 第79页 |
| ·单基因及佐剂rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+的构建 | 第79-85页 |
| ·含VP22-ORF5M融合基因转移质粒的构建与鉴定 | 第79-81页 |
| ·rPRV TK~-/gE~-／VP22E~+的筛选与纯化 | 第81-83页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+的PCR鉴定 | 第83页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+的Southern blot鉴定 | 第83-84页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+的IFA试验 | 第84-85页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+的Western blot鉴定 | 第85页 |
| ·双基因及佐剂rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+／VP22M~+的构建 | 第85-93页 |
| ·含VP22-ORF5M及VP22-ORF6融合基因转移质粒的构建与鉴定 | 第85-89页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+／VP22M~+的筛选与纯化 | 第89-90页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+／VP22M~+的PCR鉴定 | 第90-91页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+／VP22M~+的Southern blot鉴定 | 第91-92页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+／VP22M~+的IFA试验 | 第92页 |
| ·rPRV TK~-／gE~-／VP22E~+／VP22M~+的Western blot鉴定 | 第92-93页 |
| ·外源基因的插入对重组病毒在细胞上增殖的影响 | 第93页 |
| ·重组病毒对BALB／c小鼠的安全性试验 | 第93-94页 |
| ·重组病毒免疫BALB／c小鼠对PRV的保护性试验 | 第94页 |
| ·重组病毒对BALB／c小鼠的免疫试验 | 第94-97页 |
| ·重组病毒免疫小鼠的抗PRRSV及PRV中和抗体检测 | 第94-96页 |
| ·重组病毒免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应试验 | 第96-97页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂DNA疫苗的构建及实验免疫研究 | 第97-107页 |
| ·单基因及佐剂DNA疫苗表达质粒pCI-VP22ORF5M的构建与鉴定 | 第97-100页 |
| ·双基因及佐剂DNA疫苗表达质粒pCI-VP22ORF5M-VP22ORF6的构建与鉴定 | 第100-102页 |
| ·IFA检测目的融合蛋白的体外表达 | 第102页 |
| ·Western blot检测目的融合蛋白的体外表达 | 第102-104页 |
| ·DNA疫苗的动物免疫试验 | 第104-107页 |
| ·DNA疫苗抗E(GP5)特异性ELISA抗体检测 | 第104-105页 |
| ·DNA疫苗抗PRRSV中和抗体水平检测 | 第105-106页 |
| ·DNA疫苗的细胞免疫反应检测 | 第106-107页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第107-119页 |
| ·讨论 | 第107-118页 |
| ·PRRS新型疫苗靶基因的选择 | 第107页 |
| ·BHV-1 VP22作为PRRS新型疫苗免疫佐剂 | 第107-109页 |
| ·PRRSV的ORFSM基因及BHV-1 VP22基因的克隆与鉴定 | 第109页 |
| ·PRRS活病毒载体疫苗载体毒株的选择 | 第109-110页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂rPRV的构建 | 第110-112页 |
| ·外源基因在重组病毒中的表达 | 第112页 |
| ·外源基因的插入对重组病毒增殖和毒力的影响 | 第112页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂rPRV诱导实验动物的免疫反应 | 第112-114页 |
| ·PRRS DNA疫苗真核表达载体的选择及表达质粒的纯化处理 | 第114页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂DNA疫苗靶抗原蛋白的表达 | 第114-115页 |
| ·PRRS单／双基因及佐剂DNA疫苗诱导实验动物的免疫反应 | 第115-116页 |
| ·PRRS新型疫苗的发展前景 | 第116-118页 |
| ·结论 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
