| 第一章 前言 | 第1-25页 |
| 一、细胞凋亡及凋亡途径 | 第10-12页 |
| ·细胞凋亡简介 | 第10页 |
| ·细胞凋亡途径 | 第10-12页 |
| 二、凋亡调控蛋白分子 | 第12-14页 |
| ·Bcl-2 家族 | 第12-13页 |
| ·IAP 蛋白家族 | 第13-14页 |
| 三、 Survivin 简介 | 第14-16页 |
| ·Survivin 结构特点 | 第14-15页 |
| ·Survivin 表达特点 | 第15页 |
| ·Survivin 生物功能 | 第15-16页 |
| 四、 泛素-蛋白酶体降解通路 | 第16-17页 |
| 五、 RNA 干涉 | 第17-23页 |
| ·RNA 干涉的机制 | 第18-19页 |
| ·RNA 干涉的应用 | 第19页 |
| ·RNA 干涉的特点 | 第19-20页 |
| ·常用来制备siRNA 的方法 | 第20-21页 |
| ·产生RNAi的方法 | 第21页 |
| ·在治疗性研究中的问题 | 第21-23页 |
| 六、本论文的设计目的 | 第23-25页 |
| 第二章 Survivin 泛素化降解初步研究 | 第25-33页 |
| 一 实验材料 | 第25-26页 |
| ·细胞株 | 第25-26页 |
| ·试剂盒 | 第26页 |
| ·其他试剂 | 第26页 |
| 二 实验方法 | 第26-29页 |
| ·细胞培养 | 第26页 |
| ·CHX 溶液配制 | 第26页 |
| ·细胞加药处理 | 第26-27页 |
| ·Western blot 检测 | 第27页 |
| ·Survivin 及其突变体真核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·连接产物细菌转化与鉴定 | 第28-29页 |
| 三 实验结果 | 第29-31页 |
| ·CHX 处理细胞HeLa53 | 第29页 |
| ·H89和CHX共同作用HeLa53细胞 | 第29-30页 |
| ·突变片段和pCMV-Myc 和pCMV-HA 载体鉴定 | 第30-31页 |
| 四 讨论 | 第31-32页 |
| 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 RNAi 对HeLa53内源Survivin表达的影响 | 第33-55页 |
| 一 实验材料 | 第34页 |
| ·细胞株 | 第34页 |
| ·试剂盒 | 第34页 |
| ·其他试剂 | 第34页 |
| 二 实验方法 | 第34-42页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·Survivin 的siRNA 载体构建 | 第35-38页 |
| ·siRNA 片段的合成 | 第35-36页 |
| ·siRNA 片段和载体的处理 | 第36-37页 |
| ·siRNA 片段和载体的连接 | 第37页 |
| ·连接产物细菌转化,鉴定 | 第37-38页 |
| ·细胞的转染 | 第38页 |
| ·HeLa 细胞的培养和转染 | 第38页 |
| ·HeLa53 细胞的培养和转染 | 第38页 |
| ·HeLa53、MCF-7、HepG2 细胞的培养和转染 | 第38页 |
| ·RT-PCR分析细胞中Survivin的m RNA表达水平 | 第38-39页 |
| ·Western blot 印迹分析 | 第39-40页 |
| ·流式细胞术(FCM)检测细胞周期 | 第40页 |
| ·定量分析 | 第40页 |
| ·RNAi 稳定株的筛选 | 第40页 |
| ·Survivin 全长质粒的构建 | 第40-42页 |
| ·设计Survivin 全长的上下游引物 | 第40-41页 |
| ·连接产物细菌转化,鉴定 | 第41页 |
| ·pIRES-hrGFP-Survivin 质粒构建 | 第41页 |
| ·连接产物细菌转化、鉴定 | 第41-42页 |
| ·细胞转染与荧光显微镜观察 | 第42页 |
| 三 实验结果 | 第42-49页 |
| ·连接产物细菌转化、鉴定 | 第42-43页 |
| ·转染干涉载体后细胞中Survivin 蛋白的变化 | 第43-46页 |
| ·干涉载体转染48h后HeLa53细胞中Survivin mRNA的变化 | 第46-47页 |
| ·转pTet-U6-53 干涉质粒后HeLa 53 细胞的凋亡 | 第47-48页 |
| ·pTet-U6-51/-52/-53 稳定株的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| ·T载体-Survivin cDNA 鉴定 | 第49页 |
| ·T 载体-Survivin cDNA 的测序结果 | 第49页 |
| ·转染质粒pIRES-hrGFP-Survivin 细胞荧光显微镜下的观察 | 第49页 |
| 四 讨论 | 第49-55页 |
| 本章小结 | 第55页 |
| 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 中文摘要 | 第63-66页 |
| ABSTRACT | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
