| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 英文缩写 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-16页 |
| ·端粒和端粒酶的研究历史 | 第9-11页 |
| ·酵母端粒酶 | 第11-13页 |
| ·端粒酶的进行性 | 第13页 |
| ·体外重建 | 第13-15页 |
| ·逆转录酶 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| ·酵母菌株 | 第16页 |
| ·质粒的构建 | 第16-18页 |
| ·酵母est2△ rad52△单倍体菌株的构建 | 第18页 |
| ·GST-Est2p和Tlc1(或者GST-hTERT和hTR)的共表达和亲和纯化(72) | 第18-19页 |
| ·蛋白的定量 | 第19页 |
| ·端粒酶活性检测方法 | 第19-20页 |
| ·RDDP(逆转录酶)和DDDP活性检测方法 | 第20-21页 |
| ·Northern杂交 | 第21页 |
| ·端粒长度Southern杂交实验 | 第21页 |
| ·Tlc1 RNA的体外转录 | 第21-22页 |
| ·Est2p的体外翻译 | 第22页 |
| ·Est1p,Est2p和Est3p多克隆抗体的制备 | 第22-24页 |
| 第三章 结果 | 第24-53页 |
| ·GST-Est2p和/或Tlc1 在酵母中的过表达 | 第24-27页 |
| ·共同过表达GST-Est2p和Tlc1 能够重建端粒酶活性 | 第27-29页 |
| ·GST-Est2p/Tlc1(或者hTERT/hTR)复合体的纯化 | 第29-33页 |
| ·用质谱的方法鉴定与GST-Est2p/Tlc1 复合体相互结合的蛋白 | 第33页 |
| ·重组的GST-Est2p/Tlc1 复合体能够合成一轮端粒重复序列 | 第33-37页 |
| ·重组的GST-Est2p/Tlc1 复合体倾向于利用单链的Saccharomyces cerevisie端粒DNA底物 | 第37页 |
| ·重组的GST-Est2p/Tlc1 复合体在引物匹配在模板不同位置的时候表现出了不同的活性 | 第37-40页 |
| ·纯化的GST-Est2p样品具有RDDP和DDDP的活性 | 第40-42页 |
| ·逆转录酶活性可能来自与端粒酶催化亚基相互作用的未知组分 | 第42-51页 |
| ·逆转录酶结构域的置换在体内不能恢复Est2p的功能 | 第51-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-58页 |
| 第五章 参考文献 | 第58-70页 |
| 发表文章目录 | 第70页 |
| 获奖 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
