| 第一部分 绪论 | 第1-48页 |
| 第一章 绪论 | 第15-48页 |
| ·甾体化合物概述 | 第15-16页 |
| ·甾体化合物的结构、分类与临床应用 | 第15页 |
| ·甾体化合物的存在形式 | 第15页 |
| ·甾体化合物的作用 | 第15-16页 |
| ·甾体化合物的研究历程 | 第16-18页 |
| ·认知阶段 | 第17页 |
| ·生物组织提取阶段 | 第17页 |
| ·化学合成阶段 | 第17-18页 |
| ·化学合成与生物转化相结合阶段 | 第18页 |
| ·甾体化合物的生物转化 | 第18-20页 |
| ·甾体生物转化作用简介 | 第18页 |
| ·甾体生物转化反应类型 | 第18-20页 |
| ·微生物的甾体11β-羟基化反应研究进展 | 第20-36页 |
| ·微生物的甾体11β-羟基化反应 | 第20页 |
| ·氢化可的松的结构、性质及其作用 | 第20-21页 |
| ·11β-羟基化反应的微生物菌种 | 第21-22页 |
| ·11β-羟基化反应的底物与产物多样性 | 第22-24页 |
| ·11β-羟基化反应的转化工艺及技术 | 第24-28页 |
| ·培养条件 | 第28-29页 |
| ·11β-羟化作用机理 | 第29-36页 |
| ·本课题的立题依据 | 第36-38页 |
| ·国内外甾体医药工业的现状及发展趋势 | 第36-37页 |
| ·国内外氢化可的松生产研究现状 | 第37-38页 |
| ·本论文的研究内容 | 第38-39页 |
| ·论文撰写说明 | 第39-48页 |
| 第二部分 氢化可的松检测方法的确立 | 第48-58页 |
| 第二章 发酵液中氢化可的松及其有关物质分析 | 第48-58页 |
| ·引言 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第49-51页 |
| ·菌种 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·主要试液 | 第49-50页 |
| ·主要实验药品 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51页 |
| ·甾体转化实验 | 第51页 |
| ·底物RSA投料方法 | 第51页 |
| ·甾体转化产物的分析方法 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-56页 |
| ·硫酸显色法 | 第51-52页 |
| ·薄层层析法 | 第52-53页 |
| ·HPLC测定方法 | 第53-56页 |
| ·薄层层析法与HPLC法的对应统一 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第三部分 新月弯孢霉P450酶的研究与菌种选育 | 第58-101页 |
| 第三章 新月弯孢霉原生质体的制备与再生 | 第58-70页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·菌种 | 第58-59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·主要试液 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·菌丝体的培养方式 | 第60页 |
| ·酶液的配制 | 第60页 |
| ·原生质体的制备 | 第60-61页 |
| ·原生质体的再生 | 第61页 |
| ·甾体转化实验 | 第61页 |
| ·菌体重量分析 | 第61页 |
| ·转化产物分析 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-66页 |
| ·原生质体的制备 | 第61-65页 |
| ·原生质体稳定性的研究 | 第65-66页 |
| ·原生质体的形成过程 | 第66页 |
| ·原生质体的再生 | 第66页 |
| ·原生质体再生菌株生产能力测试 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-70页 |
| 第四章 新月弯孢霉P450酶的研究 | 第70-82页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·菌种 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·主要试液 | 第71页 |
| ·主要实验药品 | 第71-72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·原生质体的制备 | 第72页 |
| ·细胞色素P450酶含量检测 | 第72-73页 |
| ·细胞色素P450酶的诱导 | 第73页 |
| ·细胞色素P450酶的抑制 | 第73页 |
| ·细胞色素P450酶反应速度的测定 | 第73页 |
| ·不同浓度的底物对酶反应速度的影响 | 第73页 |
| ·P450酶在细胞内作用的部位 | 第73页 |
| ·氢化可的松转化过程中P450酶的变化 | 第73-74页 |
| ·氢化可的松含量测定 | 第74页 |
| ·菌体浓度分析 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-79页 |
| ·新月弯孢霉P450酶含量检测 | 第74-75页 |
| ·细胞色素P450酶的诱导 | 第75-76页 |
| ·细胞色素P450酶的抑制 | 第76-77页 |
| ·细胞色素P450酶反应动力学初步 | 第77-78页 |
| ·P450酶在细胞内的作用部位 | 第78页 |
| ·氢化可的松转化过程中P450酶含量的变化 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·本章小结 | 第80-82页 |
| 第五章 原生质体诱变选育酮康唑抗性突变株 | 第82-101页 |
| ·前言 | 第82页 |
| ·材料 | 第82-84页 |
| ·菌种 | 第82-83页 |
| ·培养基 | 第83页 |
| ·主要试液 | 第83页 |
| ·主要药品 | 第83页 |
| ·主要实验仪器 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-86页 |
| ·诱变育种及抗性突变株筛选方法 | 第84-85页 |
| ·甾体转化实验 | 第85页 |
| ·发酵液中甾体转化产物的分析方法 | 第85页 |
| ·氢化可的松的结构鉴定 | 第85-86页 |
| ·本章工作程序 | 第86-87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-98页 |
| ·出发菌株的选择与纯化 | 第87-89页 |
| ·NTG诱变及酮康唑抗性突变株的选育 | 第89-90页 |
| ·紫外线诱变及酮康唑抗性突变株的选育 | 第90-92页 |
| ·氢化可的松的结构鉴定 | 第92-94页 |
| ·新月弯孢霉酮康唑抗性筛选法育种浅析 | 第94-98页 |
| ·讨论 | 第98-99页 |
| ·本章小结 | 第99-101页 |
| 第四部分 氢化可的松发酵512艺的优化 | 第101-159页 |
| 第六章 底物RSA对P450酶的诱导 | 第101-110页 |
| ·前言 | 第101页 |
| ·实验材料 | 第101-102页 |
| ·菌种 | 第101页 |
| ·培养基 | 第101-102页 |
| ·主要药品 | 第102页 |
| ·主要实验仪器 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-103页 |
| ·RSA对P450酶具有诱导作用的证明 | 第102页 |
| ·原发酵工艺 | 第102页 |
| ·分析方法 | 第102-103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-108页 |
| ·底物RSA对P450酶具有诱导作用的证明 | 第103页 |
| ·底物两次投料对氢化可的松转化的影响 | 第103-105页 |
| ·pH值对转化过程的影响 | 第105-108页 |
| ·适宜新工艺的确定 | 第108页 |
| ·讨论 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-110页 |
| 第七章 增强甾体底物溶解性的研究 | 第110-131页 |
| ·引言 | 第110页 |
| ·实验材料 | 第110-111页 |
| ·菌种 | 第110页 |
| ·培养基 | 第110页 |
| ·主要实验药品 | 第110-111页 |
| ·主要实验仪器 | 第111页 |
| ·实验方法 | 第111-113页 |
| ·甾体转化实验 | 第111页 |
| ·投料方法 | 第111-113页 |
| ·甾体转化产物分析 | 第113页 |
| ·结果与讨论 | 第113-128页 |
| ·不同有机溶媒对转化的影响 | 第113-116页 |
| ·表面活性剂对转化的影响 | 第116页 |
| ·超声波处理对氢化可的松产生的影响 | 第116-119页 |
| ·高聚物硅酮对甾体转化的影响 | 第119-120页 |
| ·β-环糊精包结底物RSA对转化的影响 | 第120-128页 |
| ·最适投料方案的选择 | 第128页 |
| ·讨论 | 第128-129页 |
| ·本章小结 | 第129-131页 |
| 第八章 新月弯孢霉KA-91发酵条件的优化 | 第131-147页 |
| ·前言 | 第131页 |
| ·实验材料 | 第131-132页 |
| ·实验菌种 | 第131页 |
| ·培养基 | 第131-132页 |
| ·主要试液 | 第132页 |
| ·主要实验药品 | 第132页 |
| ·主要实验仪器 | 第132页 |
| ·实验方法 | 第132-133页 |
| ·菌种活化 | 第132页 |
| ·初始摇瓶发酵方法 | 第132页 |
| ·7L罐放大试验 | 第132-133页 |
| ·分析方法 | 第133页 |
| ·结果与讨论 | 第133-145页 |
| ·摇瓶发酵条件的优化 | 第133-143页 |
| ·7L罐放大试验 | 第143-145页 |
| ·本章小结 | 第145-147页 |
| ·确定了适宜摇瓶发酵条件 | 第145页 |
| ·7L罐放大试验 | 第145-147页 |
| 第九章 流加过氧化氢对甾体转化的影响 | 第147-159页 |
| ·前言 | 第147-149页 |
| ·实验材料 | 第149-150页 |
| ·菌种 | 第149页 |
| ·培养基 | 第149页 |
| ·主要试剂 | 第149页 |
| ·主要药品 | 第149页 |
| ·主要实验仪器 | 第149-150页 |
| ·实验方法 | 第150-151页 |
| ·新月弯孢霉对H_2O_2的作用 | 第150页 |
| ·流加H_2O_2实验 | 第150-151页 |
| ·结果与讨论 | 第151-157页 |
| ·细胞耐受H_2O_2的上限浓度和流加浓度范围的确定 | 第151页 |
| ·H_2O_2对菌体生长的影响 | 第151-152页 |
| ·H_2O_2对溶氧的影响 | 第152-153页 |
| ·流加H_2O_2对氢化可的松产生的影响 | 第153-154页 |
| ·H_2O_2对P450酶的诱导作用 | 第154-155页 |
| ·H_2O_2促进甾体转化的机理分析 | 第155-157页 |
| ·小结 | 第157-159页 |
| 第五部分 全文总结与展望 | 第159-162页 |
| 第十章 全文总结与展望 | 第159-162页 |
| ·全文总结 | 第159-161页 |
| ·本论文创新点 | 第161页 |
| ·展望 | 第161-162页 |
| 附录Ⅰ 苯巴比妥盐和过氧化物酶增殖剂 | 第162-163页 |
| 附录Ⅱ 氢化可的松红外光谱图及核磁共振谱图 | 第163-165页 |
| 附录Ⅲ 新月弯孢霉KA-91、CL-114及兰色梨头霉发酵产物HPLC谱图 | 第165-167页 |
| 附录Ⅳ β环糊精、底物RSA及其包结物的差示扫描量热图 | 第167-170页 |
| 附录Ⅴ β环糊精、底物RSA及二者不同比例包结物的红外光谱图 | 第170-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
| 发表论文 | 第174-175页 |
