| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 第一部分 文献综述 | 第7-20页 |
| 一、 植酸酶的分子生物学 | 第7-12页 |
| 1． 植酸酶的研究概况 | 第8-9页 |
| 2． 微生物植酸酶的性质 | 第9页 |
| 3． 植酸酶基因 | 第9-10页 |
| 4． 植酸酶的基因工程 | 第10-12页 |
| 二、 酵母表达系统 | 第12-17页 |
| 1． 酿酒酵母表达系统 | 第13-14页 |
| 2． 毕赤酵母表达系统 | 第14-17页 |
| 三、 影响外源基因在酵母中表达的因素 | 第17-18页 |
| 1． 酵母启动子 | 第17页 |
| 2． 酵母密码子使用偏向性 | 第17页 |
| 3． 酵母菌的分泌信号 | 第17页 |
| 4． 外源蛋白的糖基化 | 第17-18页 |
| 5． 载体质粒 | 第18页 |
| 四、 本研究的意义 | 第18-19页 |
| 五、 本研究的主要目的 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验 | 第20-53页 |
| 材料 | 第20-22页 |
| 方法 | 第22-34页 |
| （一） 高比活植酸酶基因phyS-M设计合成及克隆 | 第22-26页 |
| （二） 高效表达植酸酶基因的重组酵母的构建 | 第26-30页 |
| 1． 重组酵母表达重组子的构建 | 第26-27页 |
| 2． 电击法转化毕赤酵母 | 第27-29页 |
| 3． 重组酵母细胞的分子检测 | 第29-30页 |
| （三） 发酵罐水平重组酵母的高细胞密度发酵 | 第30-31页 |
| （四） 重组菌的稳定性检测 | 第31页 |
| （五） 表达的植酸酶PHYS的酶学性质研究 | 第31-34页 |
| 1． 表达的植酸酶PHYS的最适pH测定 | 第31-32页 |
| 2． 表达的植酸酶PHYS的最适温度测定 | 第32页 |
| 3． 表达的植酸酶PHYS的pH稳定性测定 | 第32页 |
| 4． 表达的植酸酶PHYS的热稳定性测定 | 第32页 |
| 5． 金属离子对表达的植酸酶PHYS影响的测定 | 第32页 |
| 6． 表达的植酸酶PHYS的比活性测定 | 第32-34页 |
| 结果 | 第34-49页 |
| （一）、 植酸酶基因phyS的设计改造 | 第34-37页 |
| （二）、 重组子pUC18-phyS-M的构建 | 第37-40页 |
| 1． 合成DNA小片段的拼接及初级重组子的构建 | 第37页 |
| 2． 次级重组子pUC18-phyS-M的构建 | 第37-38页 |
| 3． 重组质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| （三）、 重组酵母的构建 | 第40-45页 |
| 1． 重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| 2． 重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3． 重组酵母的筛选 | 第41-42页 |
| 4． 重组酵母中植酸酶基因的PCR分析 | 第42-43页 |
| 5． 重组酵母的Northern Blot分析 | 第43-44页 |
| 6． 重组酵母在5L发酵罐中的高细胞密度发酵 | 第44页 |
| 7． 在5L发酵罐中重组酵母的遗传稳定性 | 第44-45页 |
| （四）、 phyS-表达的植酸酶PHYS的酶学性质 | 第45-49页 |
| 1． PHYS的最适pH | 第45-46页 |
| 2． PHYS的最适温度 | 第46页 |
| 3． PHYS的酸碱稳定性 | 第46-47页 |
| 4． PHYS的耐热性 | 第47页 |
| 5． 金属离子对PHYS活性的影响 | 第47-48页 |
| 6． PHYS的比活性 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |