中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-14页 |
缩略语表 | 第14-17页 |
前言 | 第17-19页 |
文献回顾 | 第19-37页 |
细胞周期调控网络及其与肿瘤的关系 | 第19-30页 |
D型周期蛋白与肿瘤 | 第30-37页 |
材料和方法 | 第37-77页 |
主要实验材料 | 第37-42页 |
1.主要实验仪器 | 第37页 |
2.质粒、菌种、细胞株及实验动物 | 第37-39页 |
3.主要试剂 | 第39-40页 |
4.主要溶液配制 | 第40-42页 |
主要实验方法 | 第42-53页 |
1.细胞培养 | 第42页 |
2.细胞爬片和涂片的制备 | 第42页 |
3.免疫细胞化学染色 | 第42-43页 |
4.流式细胞仪检测细胞株cydin D1、MGr1-Ag表达水平 | 第43页 |
5.大肠杆菌感受态细胞的制备及转化宿主菌 | 第43-44页 |
6.质粒DNA的提取及纯化 | 第44页 |
7.Cyclin D1基因的亚克隆 | 第44-46页 |
8.Cyclin D1反义RNA真核表达载体的构建 | 第46页 |
9.Cyclin D1反义DNA在SGCR7901/VCR细胞中的稳定表达 | 第46-49页 |
10.细胞生长曲线、倍增时间及生长饱和密度的测定 | 第49页 |
11.流式细胞仪细胞周期测定 | 第49-50页 |
12.细胞生长血清依赖性检测 | 第50页 |
13.软琼脂克隆形成试验 | 第50页 |
14.药物敏感实验 | 第50-51页 |
15.MGr1促细胞增殖实验 | 第51页 |
16.Cyclin D1反义RNA稳定表达细胞MGr1-Ag表达水平检测 | 第51页 |
17.流式细胞仪双参数分析 | 第51页 |
18.裸鼠体内移植瘤生长实验 | 第51-52页 |
19.统计学处理 | 第52-53页 |
主要实验结果 | 第53-77页 |
1.Cyclin D1基因的亚克隆及限制性酶切分析 | 第53-54页 |
2.Cyclin D1反义RNA真核表达载体的构建及限制性酶分析 | 第54-56页 |
3.转染细胞neo和cyclin D1 mRNA表达的检测 | 第56-57页 |
4.Cyclin D1和MGr1-Ag蛋白水平的表达检测 | 第57-64页 |
5.Cyclin D1反义RNA稳定表达细胞的形态学观察的结果 | 第64页 |
6.细胞生长曲线、倍增时间和生长饱和密度测定结果 | 第64页 |
7.流式细胞仪测定细胞周期分布的结果 | 第64-71页 |
8.细胞生长血清依赖性检测结果 | 第71页 |
9.软琼脂克隆形成试验结果 | 第71-73页 |
10.药物敏感试验结果 | 第73页 |
11.MGr1促细胞增殖作用的检测结果 | 第73页 |
12.流式细胞仪双参数分析 | 第73-76页 |
13.裸鼠移植瘤成瘤率 | 第76-77页 |
讨论 | 第77-88页 |
有关cyclin D1反义RNA真核表达载体的构建 | 第77-79页 |
有关基因转染的方法 | 第79-80页 |
有关cyclin D1反义RNA对胃癌细胞恶性表型的影响 | 第80-82页 |
有关cyclin D1反义RNA对胃癌多药耐药细胞耐药表型的影响 | 第82-88页 |
小结 | 第88-90页 |
致谢 | 第90-91页 |
在读期间发表文章及获奖情况 | 第91-92页 |
参考文献 | 第92-107页 |