| 目录 | 第1-7页 |
| 缩写词表 | 第7-8页 |
| 论文摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 实验论文 | 第15-160页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一部分 SY-801的癌化学预防作用及其机理 | 第18-71页 |
| 内容提要 | 第18-19页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 材料 | 第20-21页 |
| 方法 | 第21-31页 |
| ·-甲基胆蒽、TPA联合诱发Balb／3T3细胞的体外二阶段恶性转化 | 第21-22页 |
| 1) 细胞培养 | 第21页 |
| 2) 细胞转化 | 第21页 |
| 3) 细胞集落形率 | 第21-22页 |
| 4) 细胞软琼脂培养实验 | 第22页 |
| 2.Balb／3T3细胞增殖实验 | 第22-23页 |
| 1) 静止状态3T3细胞培养 | 第22页 |
| 2) MTT法测定细胞增殖 | 第22页 |
| 3) 3T3细胞~3H-TdR掺入测定 | 第22-23页 |
| 3.Balb／3T3细胞癌基因、抗癌基因表达 | 第23-24页 |
| 1) 3T3细胞经TPA处理 | 第23页 |
| 2) 细胞总RNA提取 | 第23-24页 |
| 3) cDNA探针标计 | 第24页 |
| 4) RNA斑点杂交(Dot-blot) | 第24页 |
| 4.二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝脏癌前病变及病理形态组化检查和生化测定 | 第24-26页 |
| 1) 动物致癌及给药方案 | 第24-25页 |
| 2) γ-GT组化染色 | 第25页 |
| 3) 肝脏胞浆液及微粒体制备 | 第25页 |
| 4) 肝胞浆液中谷胱甘肽含量测定 | 第25页 |
| 5) 甲胎蛋白(α-fetal protein, AFP)含量测定 | 第25-26页 |
| 5.DEN诱发大鼠肝癌前病变中GST活性测定及GST-π、Mdr-1蛋白表达的测定 | 第26-27页 |
| 1) Western-blot用蛋白样品制备 | 第26页 |
| 2) 谷胱甘肽S转移酶(GST)活性测定 | 第26-27页 |
| (1) GST总酶活性测定 | 第26页 |
| (2) GST-α亚型活性测定 | 第26页 |
| (3) GST-μ亚型活性测定 | 第26-27页 |
| (4) 微粒体中GST三聚体活性测定 | 第27页 |
| 3) Western-blot | 第27页 |
| 6.DEN诱发大鼠肝癌前病变中相关基因表达的测定 | 第27页 |
| 1) 肝组织总RNA提取 | 第27页 |
| 2) Northern-blot | 第27页 |
| 7.正常及诱导大鼠肝微粒体对亚硝胺的代谢 | 第27-30页 |
| 1) 大鼠肝微粒体P-450诱导 | 第27-28页 |
| 2) 细胞色素P-450测定 | 第28页 |
| 3) 亚硝胺经肝微粒体代谢测定 | 第28-30页 |
| (1) 二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN)脱乙基化(deethylation)、脱硝基化(denitrolation)活性测定 | 第28-30页 |
| (2) 二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine, DMN)脱甲基化(demethylation)、脱硝基化(denitrolation)活性测定 | 第30页 |
| 8.诱导大鼠肝胞浆液GST活性及GST·π表达测定 | 第30页 |
| 9.非程序性DNA合成(UDS)试验 | 第30页 |
| 10.抗氧化实验 | 第30-31页 |
| 1) 对黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶系统产生O_(2~-)的清除作用 | 第30-31页 |
| 2) 对Fenton反应(Fe~(2+)／H_2O_2)产生OH·的清除作用 | 第31页 |
| 结果 | 第31-71页 |
| (一) SY-801对Balb／3T3细胞体外二阶段恶性转化的影响及其及机理 | 第31-43页 |
| 1.转化细胞的形态学观察及SY-801对转化灶数目的影响 | 第31-32页 |
| 2.SY-801对3T3细胞集落形成率的影响 | 第32-33页 |
| 3.SY-801对恶性转化3T3细胞在软琼脂中克隆形成率的影响 | 第33-34页 |
| 4.SY-801对TPA促进3T3细胞增殖的影响 | 第34-35页 |
| 5.SY-801对TPA所致Balb／3T3细胞癌基因(c-myc、H-ras)、抑癌幕因(P53)和PKCα基因mRNA表达的影响 | 第35-43页 |
| (二) SY-801对体内二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌前病变的影响及其机理 | 第43-71页 |
| 1.SY-801对DEN诱导大鼠肝癌前病变的病理形态及组化表型改变的影响 | 第43-47页 |
| 2.SY-801对DEN诱导大鼠肝癌前病变中GST-π蛋白表达及相关生化性质的改变的影响 | 第47-51页 |
| 3.SY-801对DEN诱导大鼠肝癌前病变肝组织中癌基因、PKCα和MDR基因表达的影响 | 第51-55页 |
| 4.SY-801对DEN诱导大鼠癌前病变肝组织甲胎蛋白(AFP)含量改变的影响 | 第55-56页 |
| 5.SY-801处理大鼠肝微粒体对DEN代谢转化的作用 | 第56-61页 |
| 6.SY-801对正常大鼠肝脏GST同工酶活性、蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| 7.SY-801对DEN诱导体外培养大鼠肝细胞的非程序性DNA合成(UDS)的影响 | 第62-63页 |
| 1) DEN诱导大鼠肝细胞UDS的最适条件 | 第62-63页 |
| 2) SY-801对DEN所致大鼠肝细胞UDS的作用 | 第63页 |
| 8.抗氧化作用 | 第63-71页 |
| 1) SY-801对黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶系统产生O_(2~-)的清除作用 | 第63页 |
| 2) SY-801对Fenton反应(Fe~(2+)／H_2O_2)产生OH·的清除作用 | 第63-71页 |
| 第二部分 SY-801对肿瘤耐药的逆转作用及其机理 | 第71-102页 |
| 内容提要 | 第71-72页 |
| 前言 | 第72-73页 |
| 材料 | 第73页 |
| 方法 | 第73-76页 |
| 1.细胞培养条件 | 第73-74页 |
| 2.MTT法测定药物的细胞毒作用及耐药逆转活性 | 第74页 |
| 3.MCF-7和Adr~R MCF-7细胞内Adr蓄积测定 | 第74-75页 |
| 4.细胞内谷胱甘肽含量的测定 | 第75页 |
| 5.细胞内GST活性测定 | 第75页 |
| 6.Western-blot法测定细胞内Mdr-1、Bcl-2蛋白表达测定 | 第75页 |
| 7.免疫组织化学法测定细胞Mdr-1蛋白原位表达 | 第75-76页 |
| 结果 | 第76-102页 |
| 1.SY-801对KB、KBv200、MCF-7和Adr~R MCF-7细胞的毒性作用及逆转耐药作用浓度的选择 | 第76-79页 |
| 2.SY-801对KBv200和Adr~R MCF-7细胞耐药的逆转作用 | 第79-88页 |
| 3.SY-801对Adr~R MCF-7细胞内药物蓄积的影响 | 第88页 |
| 4.SY-801对KBv200和Adr~R MCF-7细胞内谷胱甘肽含量的影响 | 第88页 |
| 5.SY-801对Adr~R MCF-7和KBv200细胞内谷胱甘肽S转移酶(GST)活性的影响 | 第88-93页 |
| 6.SV-801对KBv200和Adr~R MCF-7细胞内Mdr-1蛋白表达的影响 | 第93-94页 |
| 1) Western-blot | 第93-94页 |
| 2) 原位免疫组化 | 第94页 |
| 7.SY-801对Adr~R MCF-7细胞中Bcl-2蛋白表达的影响 | 第94-102页 |
| 第三部分 SY-801对中性粒细胞及过氧化氢所致原代培养大鼠肝细胞损伤的保护作用及其机理 | 第102-140页 |
| 内容提要 | 第102页 |
| 前言 | 第102-103页 |
| 材料 | 第103页 |
| 方法 | 第103-107页 |
| 1.大鼠腹腔中性粒细胞制备 | 第103-104页 |
| 2.大鼠肝细胞分离与培养 | 第104页 |
| 3.中性粒细胞与肝细胞共培养 | 第104页 |
| 4.肝细胞损伤测定 | 第104-105页 |
| 5.肝细胞生成MDA的测定 | 第105页 |
| 6.肝细胞膜流动性的测定 | 第105页 |
| 7.肝细胞细胞内钙浓度([Ca~(2+)]i)的测定 | 第105-106页 |
| 8.肝细胞谷胱甘肽含量测定 | 第106页 |
| 9.中性粒细胞释放O_2~-的测定 | 第106页 |
| 10.中性粒细胞释放H_2O_2的测定 | 第106页 |
| 11.中性粒细胞释放NO的测定 | 第106-107页 |
| 12.中性粒细胞细胞内钙浓度([Ca~(2+)]i)的测定 | 第107页 |
| 结果 | 第107-140页 |
| 1.SY-801对中性粒细胞所致原代培养大鼠肝细胞损伤的影响 | 第107-112页 |
| 2.SY-801对过氧化氨所致大鼠肝细胞损伤的影响 | 第112-125页 |
| 3.SY-801对中性粒细胞氧自由基生成的影响 | 第125-134页 |
| 1) SY-801对不同刺激剂引起PMNs释放O~(2-)的影响 | 第125页 |
| 2) SY-801对PMA刺激PMNs释放H_2O_2的影响 | 第125-134页 |
| 4.SY-801对中性粒细胞NO生成的影响 | 第134-137页 |
| 5.SY-801对中性粒细胞活化时细胞内钙改变的影响 | 第137-140页 |
| 讨论 | 第140-150页 |
| 结语 | 第150-151页 |
| 参考文献 | 第151-160页 |
| 文献综述：谷胱甘肽S转移酶基因的诱导与表达调控 | 第160-175页 |
| 致谢 | 第175页 |
