| 缩略词 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 文献综述 | 第15-24页 |
| 一氧化氮合成酶及其调节 | 第15-24页 |
| (一) NOS的一般特点 | 第15页 |
| (二) NOS的分类及分布 | 第15-17页 |
| (三) NOS的纯化 | 第17页 |
| (四) NOS的酶学功能 | 第17-18页 |
| (五) NOS的分子克隆 | 第18-19页 |
| (六) NOS染色体定位 | 第19页 |
| (七) NOS的调节 | 第19-24页 |
| 研究论文 一氧化氮合成酶在神经损伤中的作用机制研究 | 第24-88页 |
| 前言 | 第24-26页 |
| 第一部分 一氧化氮合成酶的提取、纯化和特性研究 | 第26-46页 |
| 1 材料和方法 | 第26-29页 |
| 1．1 动物 | 第26页 |
| 1．2 试剂 | 第26页 |
| 1．3 NOS提取 | 第26-27页 |
| 1．4 牛小脑NOS部分纯化 | 第27页 |
| 1．5 猪小脑NOS纯化 | 第27页 |
| 1．6 大鼠小脑NOS纯化 | 第27-28页 |
| 1．7 NOS活性测定 | 第28页 |
| 1．8 蛋白质浓度测定 | 第28页 |
| 1．9 NADPH-d活性测定 | 第28-29页 |
| 1．10 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29页 |
| 1．11 统计学分析 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-44页 |
| 2．1 提取液NOS的酶动力学特性 | 第29-30页 |
| 2．1．1 提取液NOS的量效与时效变化 | 第29页 |
| 2．1．2 L-Arg对NOS活性的影响 | 第29页 |
| 2．1．3 Ca~(2+)、CaM、BH_4和NADPH等辅助因子对NOS活性的影响 | 第29-30页 |
| 2．1．4 EGTA、L-NMA和TFP对NOS活性的影响 | 第30页 |
| 2．2 牛、猪、大鼠NOS的纯化 | 第30-32页 |
| 2．2．1 牛小脑NOS部分纯化 | 第30-31页 |
| 2．2．2 猪小脑NOS纯化 | 第31-32页 |
| 2．2．3 大鼠小脑NOS纯化 | 第32页 |
| 2．3 提取液NADPH-d的特性 | 第32-44页 |
| 2．3．1 不同蛋白质浓度对NADPH-d活性的影响 | 第32页 |
| 2．3．2 NBT、NADPH对NADPH-d活性的影响 | 第32页 |
| 2．3．3．L-Arg和L-NMA对NADPH-d活性的影响 | 第32-33页 |
| 2．3．4 NADPH-d的稳定性 | 第33页 |
| 2．3．5 大鼠神经组织NOS活性与NADPH-d活性分布比较 | 第33-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第二部分 NMDA-NO-cGMP通路在脑缺血损伤中的作用研究 | 第46-58页 |
| 1 材料和方法 | 第46-48页 |
| 1．1 动物与试剂 | 第46页 |
| 1．2 大鼠脑缺血模型 | 第46-47页 |
| 1．3 脑突触粗膜制备和~3H-MK801结合试验 | 第47页 |
| 1．4 cNOS和iNOS活性测定 | 第47页 |
| 1．5 cGMP抗体制备 | 第47页 |
| 1．6 脑组织cGMP含量测定 | 第47-48页 |
| 1．6．1 提取 | 第47-48页 |
| 1．6．2 含量测定 | 第48页 |
| 1．6．3 含量计算 | 第48页 |
| 1．7 统计学分析 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-54页 |
| 2．1 Glu,Gly和SPD对脑突触粗膜~3H-MK801结合的影响 | 第48页 |
| 2．2 脑缺血后~3H-MK801结合的变化 | 第48-49页 |
| 2．3 cNOS活性变化 | 第49页 |
| 2．4 iNOS活性变化 | 第49页 |
| 2．5 cGMP含量变化 | 第49-54页 |
| 3 讨论 | 第54-58页 |
| 第三部分 原生型一氧化氮合成酶在NG108-15细胞中的表达 | 第58-69页 |
| 1 材料和方法 | 第58-63页 |
| 1．1 质粒、菌株、细胞 | 第58页 |
| 1．2 工具酶 | 第58页 |
| 1．3 试剂 | 第58-59页 |
| 1．4 PCR引物 | 第59页 |
| 1．5 质粒的小量提取 | 第59页 |
| 1．6 载体的酶切处理 | 第59页 |
| 1．7 DNA片段回收 | 第59-60页 |
| 1．8 DNA连接 | 第60页 |
| 1．9 感受态细胞的制备 | 第60页 |
| 1．10 质粒转化感受态细胞 | 第60页 |
| 1．11 质粒的大量提取 | 第60-61页 |
| 1．12 质粒的纯化 | 第61页 |
| 1．13 质粒的进一步纯化 | 第61页 |
| 1．14 NG108-15细胞培养 | 第61页 |
| 1．15 NG108-15细胞转染前处理 | 第61-62页 |
| 1．16 NG108-15细胞的转染 | 第62页 |
| 1．16．1 磷酸钙共沉淀法 | 第62页 |
| 1．16．2 Lipofectin法 | 第62页 |
| 1．17 细胞样品处理 | 第62页 |
| 1．18 NOS活性测定 | 第62页 |
| 1．19 NADPH-d组化染色 | 第62-63页 |
| 1．20 统计学分析 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-68页 |
| 2．1 cNOS表达载体的构建 | 第63页 |
| 2．2 cNOS表达载体的鉴定 | 第63-64页 |
| 2．3 稳定表达NG108-15细胞株的筛选 | 第64-68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-88页 |
| 附录一 大剂量强啡肽对大鼠脊髓NOS活性和NMDA受体功能的影响 | 第88-100页 |
| 1 材料和方法 | 第88-90页 |
| 1．1 动物与试剂 | 第88页 |
| 1．2 蛛网膜下腔插管与给药 | 第88-89页 |
| 1．3 后肢功能判定 | 第89页 |
| 1．4 取材与冻存 | 第89页 |
| 1．5 NOS活性测定 | 第89-90页 |
| 1．6 脊髓膜制备和~3H-MK801结合试验 | 第90页 |
| 1．7 统计分析 | 第90页 |
| 2 结果 | 第90-94页 |
| 2．1 正常脊髓NOS活性和~3H-MK801结合 | 第90页 |
| 2．2 Dyn A(1-17)对神经功能的影响 | 第90-91页 |
| 2．3 Dyn致持久瘫后腹侧与背侧脊髓NOS活性变化 | 第91页 |
| 2．4 Dyn致持久瘫后腹侧与背侧脊髓~3H-MK801结合变化 | 第91页 |
| 2．5 急性死亡大鼠脊髓NOS活性和~3H-MK801结合变化 | 第91-94页 |
| 3 讨论 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 附录二 NOS抑制剂对Dyn致瘫后大鼠脊髓NOS活性和NMDA受体功能的影响 | 第100-109页 |
| 1 材料和方法 | 第100页 |
| 1．1 药品和试剂 | 第100页 |
| 1．2 Dyn致瘫模型,NOS活性和~3H-MK801结合测定 | 第100页 |
| 1．3 统计分析 | 第100页 |
| 2 结果 | 第100-105页 |
| 2．1 血管性eNOS和神经元性bNOS无选择性抑制剂L-NAME | 第100-101页 |
| 2．2 神经元性bNOS选择性抑制剂7-NI | 第101页 |
| 2．3 诱导型iNOS高选择性抑制剂AG | 第101-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 附录三 NO／NOS与抗炎免疫 | 第109-116页 |
| 前言 | 第109页 |
| 一、NO及NOS | 第109-111页 |
| (一)NO的发现 | 第109页 |
| (二)NO的生物合成及代谢 | 第109-110页 |
| (三)NO合成酶 | 第110-111页 |
| (四)NO／NOS研究方法 | 第111页 |
| 二、NO／NOS在抗炎免疫中的作用及其机制 | 第111-115页 |
| (一)NO在动物中的抗炎免疫作用 | 第111-112页 |
| (二)NO在人免疫系统中的作用 | 第112页 |
| (三)NO的作用机制 | 第112-115页 |
| 参考文献 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
