| 摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 重金属污染 | 第12-17页 |
| ·重金属的来源、毒性及其危害 | 第12页 |
| ·重金属铅 | 第12-13页 |
| ·铅污染的来源 | 第12-13页 |
| ·铅对人体的危害 | 第13页 |
| ·重金属在作物体内的积累 | 第13-14页 |
| ·重金属对作物生长发育的影响 | 第14-16页 |
| ·重金属对作物外部形态的影响 | 第14-15页 |
| ·重金属对作物生理生化的影响 | 第15-16页 |
| ·重金属胁迫下作物的抗性机理研究 | 第16-17页 |
| ·作物对重金属胁迫的避性 | 第16-17页 |
| ·作物对重金属胁迫的耐性 | 第17页 |
| 2 miRNA概述 | 第17-28页 |
| ·miRNA的发现及研究 | 第17-19页 |
| ·植物miRNA的特征 | 第19页 |
| ·植物miRNA的功能 | 第19-24页 |
| ·miRNA与植物生长发育 | 第20-21页 |
| ·miRNA对根发育的影响 | 第20页 |
| ·miRNA对茎和叶发育的影响 | 第20-21页 |
| ·miRNA对花发育的影响 | 第21页 |
| ·miRNA对植物生长素信号的调控 | 第21-22页 |
| ·miRNA与逆境胁迫 | 第22-23页 |
| ·重金属胁迫相关miRNA的研究进展 | 第23-24页 |
| ·植物miRNA的研究方法 | 第24-28页 |
| ·miRNA的鉴定 | 第24-26页 |
| ·miRNA克隆 | 第24页 |
| ·miRNA芯片法 | 第24-25页 |
| ·生物信息学预测miRNA | 第25页 |
| ·深度测序技术 | 第25-26页 |
| ·miRNA的表达分析方法 | 第26-27页 |
| ·应用杂交方法的miRNA表达检测 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第27页 |
| ·miRNA的功能分析方法 | 第27-28页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 4 试验技术路线 | 第29-30页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第30-44页 |
| 1 试验材料 | 第30-32页 |
| ·供试玉米材料 | 第30页 |
| ·酶与生化试剂 | 第30页 |
| ·试剂盒 | 第30页 |
| ·主要酶类和相关试剂 | 第30页 |
| ·PCR引物 | 第30-31页 |
| ·实时荧光定量PCR引物 | 第30-31页 |
| ·半定量RT-PCR引物 | 第31页 |
| ·使用的数据库和软件 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2 试验方法 | 第32-44页 |
| ·Solexa深度测序 | 第32-35页 |
| ·材料的培养及处理 | 第32页 |
| ·材料总RNA的制备 | 第32-33页 |
| ·测序原理 | 第33-35页 |
| ·试验流程 | 第33页 |
| ·信息分析流程 | 第33-35页 |
| ·深度测序结果的生物信息学分析 | 第35页 |
| ·序列的初步分析 | 第35页 |
| ·根系中鉴定的miRNA | 第35页 |
| ·miRNA的靶基因预测 | 第35页 |
| ·Pb胁迫下玉米根系miRNA及其靶基因的表达分析 | 第35-44页 |
| ·材料的培养及处理 | 第35-36页 |
| ·荧光定量PCR检测miRNA的表达模式 | 第36-41页 |
| ·小分子RNA(≤200 nt)的提取 | 第36-37页 |
| ·候选miRNA的荧光定量PCR验证及表达分析 | 第37-41页 |
| ·miRNA靶基因的半定量RT-PCR分析 | 第41-44页 |
| ·总RNA的提取 | 第41页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第41-42页 |
| ·模板均一化 | 第42-43页 |
| ·靶基因半定量RT-PCR检测 | 第43-44页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第44-72页 |
| 1 Pb胁迫下玉米根系小分子RNA的深度测序 | 第44-61页 |
| ·小分子RNA的序列信息 | 第44-45页 |
| ·根系中已知的miRNA分析 | 第45-53页 |
| ·根系中保守的miRNA及前体分析 | 第45页 |
| ·根系中保守miRNA的丰度分析 | 第45-46页 |
| ·根系中已知miRNA的靶基因预测 | 第46-53页 |
| ·根系中新发现的miRNA分析 | 第53-61页 |
| ·根系中新发现的miRNA及前体分析 | 第53-54页 |
| ·miRNA家族的同源性及保守性分析 | 第54-56页 |
| ·根系中新发现的miRNA的靶基因预测 | 第56-61页 |
| 2 Pb胁迫下玉米根系相关miRNA及靶基因的表达分析 | 第61-72页 |
| ·候选miRNA的荧光定量PCR分析 | 第61-69页 |
| ·≤200 nt的小分子RNA的检测 | 第61-62页 |
| ·miRNA的真实性鉴定 | 第62-63页 |
| ·候选miRNA的荧光定量PCR分析 | 第63-69页 |
| ·5s rRNA和miRNA加尾产物扩增熔解曲线 | 第63页 |
| ·荧光定量标准曲线 | 第63页 |
| ·miRNA的相对定量表达 | 第63-69页 |
| ·zma-root-miR24的相对表达量 | 第64-65页 |
| ·zma-root-miR65的相对表达量 | 第65-66页 |
| ·zma-root-miR69的相对表达量 | 第66页 |
| ·zma-root-miR71的相对表达量 | 第66-67页 |
| ·zma-root-miR95的相对表达量 | 第67-68页 |
| ·zma-root-miR149的相对表达量 | 第68-69页 |
| ·候选miRNA靶基因的半定量RT-PCR分析 | 第69-72页 |
| ·总RNA的检测 | 第69-70页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第70页 |
| ·模板均一化 | 第70页 |
| ·靶基因半定量RT-PCR结果 | 第70-72页 |
| 第四部分 讨论 | 第72-83页 |
| 1 miRNA的鉴定方法比较 | 第72-73页 |
| 2 Pb胁迫下玉米根系miRNA | 第73-75页 |
| 3 miRNA的靶基因预测 | 第75-78页 |
| 4 几个与Pb胁迫相关的miRNA及靶基因的表达分析 | 第78-80页 |
| ·zma-root-miR69 | 第78页 |
| ·zma-root-miR71 | 第78-79页 |
| ·zma-root-miR95 | 第79页 |
| ·zma-root-miR149 | 第79-80页 |
| 5 玉米根系响应重金属Pb胁迫可能的机制 | 第80-81页 |
| 6 今后的研究方向 | 第81-83页 |
| 第五部分 结论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 博士在读期间发表的论文 | 第104页 |
