| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第17-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-47页 |
| 第一节 阿尔茨海默病发病机制研究 | 第19-25页 |
| 第二节 治疗阿尔茨海默病药物研究进展 | 第25-34页 |
| 第三节 报告基因技术理论基础及其应用 | 第34-39页 |
| 第四节 人参皂苷Re药理学作用研究进展 | 第39-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 第二章 人参皂苷Re抗阿尔茨海默病作用研究 | 第47-116页 |
| 第一部分 人参皂苷Re基于报告基因和雌激素受体β亚型信号通路的抗阿尔茨海默病作用 | 第47-74页 |
| 一、实验材料 | 第50-51页 |
| 二、实验方法 | 第51-66页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第51-57页 |
| ·细胞模型建立 | 第57-58页 |
| ·G418筛选阳性克隆细胞株的浓度确定 | 第58-59页 |
| ·稳定转染 | 第59-60页 |
| ·β-gal的检测 | 第60-61页 |
| ·报告基因的检测 | 第61-62页 |
| ·E_2对SEAP诱导表达的量效关系 | 第62页 |
| ·E_2对SEAP诱导表达的时效关系 | 第62页 |
| ·E_2对细胞增殖功能的影响 | 第62-63页 |
| ·模型特异性考察 | 第63页 |
| ·模型稳定性评价 | 第63-64页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第64-65页 |
| ·模型应用——样品的筛选 | 第65-66页 |
| 三、实验结果 | 第66-71页 |
| ·细胞株的选择 | 第66页 |
| ·G418作用剂量的选择 | 第66-67页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第67页 |
| ·E_2对SEAP诱导表达的量效关系 | 第67-68页 |
| ·E_2对SEAP诱导表达的时效关系 | 第68-69页 |
| ·MTT实验考察E_2对细胞增殖功能的影响 | 第69页 |
| ·模型的稳定性考察 | 第69-70页 |
| ·模型的特异性考察 | 第70页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第70-71页 |
| 四、讨论 | 第71-72页 |
| 小结 | 第72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第二部分 人参皂苷Re对兴奋性氨基酸神经毒性的抑制作用 | 第74-85页 |
| 第一节 人参皂苷Re对谷氨酸诱导的细胞损伤的影响 | 第74-77页 |
| 一、实验材料 | 第74页 |
| 二、实验方法 | 第74-75页 |
| ·细胞处理 | 第74-75页 |
| ·药物处理 | 第75页 |
| ·MTT法测定细胞存活能力 | 第75页 |
| ·LDH活性测定 | 第75页 |
| ·统计学处理 | 第75页 |
| 三、实验结果 | 第75-77页 |
| ·谷氨酸损伤模型的建立 | 第75-76页 |
| ·细胞形态学观察 | 第76页 |
| ·MTT法测细胞活力 | 第76页 |
| ·Re对LDH释放的影响 | 第76-77页 |
| 第二节 人参皂苷Re对神经细胞内游离钙浓度的影响 | 第77-83页 |
| 一、实验材料 | 第77-78页 |
| 二、实验方法 | 第78-79页 |
| ·细胞准备 | 第78页 |
| ·负载Fura-2/AM | 第78页 |
| ·去除细胞外Fura-2/AM | 第78页 |
| ·荧光测定 | 第78页 |
| ·细胞胞质游离钙浓度[Ca~(2+)]i计算 | 第78-79页 |
| ·药物处理 | 第79页 |
| ·统计学处理 | 第79页 |
| 三、实验结果 | 第79-81页 |
| ·静息状态游离钙测定 | 第79-80页 |
| ·Re对Glu引起的钙内流的影响 | 第80页 |
| ·Re对KCl引起的钙内流的影响 | 第80-81页 |
| 四、讨论 | 第81-83页 |
| 小结 | 第83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 第三部分 人参皂苷Re对大鼠海马原代神经细胞损伤的保护作用 | 第85-93页 |
| 一、实验材料 | 第85页 |
| 二、实验方法 | 第85-87页 |
| ·大鼠海马原代神经细胞的分离和培养 | 第85-86页 |
| ·谷氨酸损伤模型的建立 | 第86页 |
| ·膜蛋白的测定 | 第86页 |
| ·荧光偏振度法测定神经细胞膜脂流动性 | 第86-87页 |
| ·MTT法测定细胞存活能力 | 第87页 |
| ·LDH活性测定 | 第87页 |
| ·人参皂苷Re对正常原代神经细胞增殖功能的影响 | 第87页 |
| 三、实验结果 | 第87-90页 |
| ·原代培养海马神经细胞形态学观察 | 第87-88页 |
| ·人参皂苷Re对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤荧光偏振度的影响 | 第88页 |
| ·人参皂苷Re对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤微粘度的影响 | 第88-89页 |
| ·人参皂苷Re对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤细胞存活能力的影响 | 第89页 |
| ·人参皂苷Re对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤LDH释放活性的影响 | 第89-90页 |
| ·人参皂苷Re对正常原代神经细胞增殖功能的影响 | 第90页 |
| 四、讨论 | 第90-91页 |
| 小结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-93页 |
| 第四部分 人参皂苷Re对β-淀粉样蛋白损伤的作用 | 第93-101页 |
| 一、实验材料 | 第93页 |
| 二、实验方法 | 第93-94页 |
| ·Aβ_(1-40)的"老化"处理 | 第93页 |
| ·细胞干预处理 | 第93-94页 |
| ·Aβ_(1-40)对SHSY5Y细胞的影响 | 第94页 |
| ·Re对Aβ_(1-40)所致SHSY5Y细胞损伤的保护作用 | 第94页 |
| ·MTT法测定细胞存活能力 | 第94页 |
| ·LDH活性测定 | 第94页 |
| ·统计学处理 | 第94页 |
| 三、实验结果 | 第94-99页 |
| ·Aβ_(1-40)致SHSY5Y细胞损伤作用的量效关系 | 第94-96页 |
| ·Aβ_(1-40)致SHSY5Y细胞损伤作用的时效关系 | 第96-97页 |
| ·Re对Aβ_(1-40)致SHSY5Y细胞损伤保护作用的量效关系 | 第97-98页 |
| ·Re对Aβ_(1-40)致SHSY5Y细胞损伤保护作用的时效关系 | 第98-99页 |
| 四、讨论 | 第99-100页 |
| 小结 | 第100页 |
| 参考文献 | 第100-101页 |
| 第五部分 Re基于报告基因和NF-κB信号通路的抗炎药物细胞筛选模型的建立和应用 | 第101-110页 |
| 一、实验材料 | 第101-102页 |
| 二、实验方法 | 第102-103页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第102页 |
| ·细胞培养及载体DNA的转染 | 第102页 |
| ·SEAP化学发光检测和β-gal的检测 | 第102页 |
| ·HygB筛选阳性克隆细胞株浓度的确定 | 第102-103页 |
| ·LPS对SEAP诱导表达的时效和量效关系 | 第103页 |
| ·PDTC对SEAP报告基因表达的影响 | 第103页 |
| ·LPS对细胞增殖功能的影响 | 第103页 |
| ·模型稳定性考察 | 第103页 |
| ·模型的应用 | 第103页 |
| 三、实验结果 | 第103-108页 |
| ·HygB作用剂量的选择 | 第103-104页 |
| ·LPS对SEAP诱导表达的时效和量效关系 | 第104-105页 |
| ·PDTC剂量的选择 | 第105-106页 |
| ·MTF实验考察LPS对细胞增殖功能的影响 | 第106页 |
| ·模型的稳定性考察 | 第106-107页 |
| ·Re对LPS诱导的NF-κB信号通路的抑制作用 | 第107页 |
| ·MTT实验考察Re对细胞增殖功能的影响 | 第107-108页 |
| 四、讨论 | 第108-109页 |
| 小结 | 第109页 |
| 参考文献 | 第109-110页 |
| 第六部分 人参皂苷Re对大鼠脑缺血再灌注损伤线粒体的保护作用 | 第110-116页 |
| 一、实验材料 | 第110页 |
| 二、实验方法 | 第110-112页 |
| ·动物分组及大鼠MCAO模型制备 | 第110-111页 |
| ·模型鉴定 | 第111页 |
| ·脑线粒体提取 | 第111页 |
| ·线粒体肿胀度检测 | 第111页 |
| ·脂质过氧化产物MDA测定 | 第111页 |
| ·H~+-ATP酶活性检测 | 第111-112页 |
| ·统计学处理 | 第112页 |
| 三、实验结果 | 第112-113页 |
| ·人参皂苷Re对线粒体肿胀度的影响 | 第112页 |
| ·人参皂苷Re对过氧化产物MDA生成的影响 | 第112-113页 |
| ·人参皂苷Re对H~+-ATP酶活性的影响 | 第113页 |
| 四、讨论 | 第113-114页 |
| 小结 | 第114页 |
| 参考文献 | 第114-116页 |
| 结论 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 附表 | 第118-135页 |
| 个人简历 | 第135-136页 |
| 发表文章 | 第136页 |
