| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-33页 |
| ·细菌重金属离子平衡研究进展 | 第15-22页 |
| ·重金属的生物学特性 | 第15页 |
| ·细菌重金属离子吸收系统 | 第15-16页 |
| ·细菌重金属的抗性机制 | 第16-17页 |
| ·细菌的重金属离子排放系统 | 第17-19页 |
| ·RND型排放泵 | 第17-18页 |
| ·CDF型排放泵 | 第18页 |
| ·P-型ATP酶 | 第18-19页 |
| ·细菌重金属离子调控蛋白 | 第19-22页 |
| ·MerR家族 | 第20页 |
| ·ArsR/SmtB家族 | 第20页 |
| ·Fur家族 | 第20-22页 |
| ·DtxR家族 | 第22页 |
| ·NikR家族 | 第22页 |
| ·细菌锌离子平衡研究进展 | 第22-27页 |
| ·细菌的锌离子吸收系统 | 第24-25页 |
| ·细菌的锌离子排放系统 | 第25页 |
| ·细菌锌离子调控蛋白 | 第25-27页 |
| ·黄单胞菌重金属抗性基因研究进展 | 第27-29页 |
| ·植物病原细菌致病性的调控研究进展 | 第29-31页 |
| ·十字花科黑腐病菌简介 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的意义 | 第32-33页 |
| 第二章 材料和方法 | 第33-64页 |
| ·质粒 | 第33-34页 |
| ·菌株 | 第34-36页 |
| ·引物 | 第36-39页 |
| ·抗生素 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·溶液 | 第40-43页 |
| ·实验用菌株的培养条件和保存方法 | 第43-44页 |
| ·总DNA提取 | 第44页 |
| ·质粒提取 | 第44-45页 |
| ·常规PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·DNA片段纯化 | 第46页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第46页 |
| ·DNA连接 | 第46页 |
| ·转化实验 | 第46-48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第48页 |
| ·三亲本接合 | 第48页 |
| ·DNA芯片分析 | 第48-49页 |
| ·突变体的构建 | 第49-51页 |
| ·突变体的互补 | 第51页 |
| ·金属敏感性检测 | 第51-52页 |
| ·细胞内锌含量检测 | 第52页 |
| ·融合PCR | 第52-53页 |
| ·GUS活性检测 | 第53-54页 |
| ·6×His Zur蛋白的表达和纯化 | 第54页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第54-55页 |
| ·电泳迁移率变动试验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA) | 第55-56页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第56-57页 |
| ·Dnase I足迹试验(Dnase I footprinting) | 第57页 |
| ·Xcc总RNA提取及去除DNA污染 | 第57-59页 |
| ·5'-RACE | 第59-61页 |
| ·RT-RCR | 第61-62页 |
| ·体外转录(In vitro transcription) | 第62-63页 |
| ·植株致病性实验 | 第63页 |
| ·过敏性反应实验 | 第63页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第63-64页 |
| 第三章 十字花科黑腐病菌中Zur调控元的鉴定 | 第64-91页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·锌丰富条件下Zur调控元的鉴定 | 第64-67页 |
| ·锌丰富条件下Zur调控元的验证 | 第67-78页 |
| ·启动子与gusA基因转录融合报告质粒的构建 | 第67-76页 |
| ·报告质粒的GUS活性分析表明芯片结果是可靠的 | 第76-78页 |
| ·基本营养条件下Zur调控元的鉴定 | 第78-87页 |
| ·基本营养条件下Zur调控元的验证 | 第87-89页 |
| ·小结 | 第89-91页 |
| 第四章 十字花科黑腐病菌中锌离子平衡相关基因的鉴定 | 第91-107页 |
| ·引言 | 第91页 |
| ·生物信息学分析推测出锌离子平衡相关的基因 | 第91-94页 |
| ·XC0266-XC0267、XC2471-XC2472-XC2473、XC3786-XC3787-XC3788和XC2976的表达受Zn~(2+)浓度影响 | 第94-96页 |
| ·XC0266-XC0267、XC2471-XC2472-XC2473、XC3786-XC3787-XC3788和XC2976的功能鉴定 | 第96-105页 |
| ·XC2976、XC3786和XC3788基因整合突变体的构建 | 第96-99页 |
| ·XC0266、XC0267、XC2471、XC2472、XC2473、XC3786、XC3787和XC3788基因突变体对低Zn~(2+)浓度敏感 | 第99-101页 |
| ·XC2976编码一个CDF型金属排放泵 | 第101-105页 |
| ·XC2976的产物具有典型的CDF蛋白的结构特点 | 第101-102页 |
| ·XC2976突变体对高浓度Zn~(2+)敏感且细胞内聚集的锌比野生型多 | 第102-103页 |
| ·XC2976能排放多种金属底物 | 第103-104页 |
| ·2976nk互补菌株C2976nk的构建 | 第104-105页 |
| ·小结 | 第105-107页 |
| 第五章 十字花科黑腐病菌中Zur调控锌离子平衡相关基因的机理研究 | 第107-127页 |
| ·引言 | 第107页 |
| ·Zn~(2+)对锌离子平衡相关基因的诱导依赖于Zur | 第107-108页 |
| ·Zn~(2+)吸收系统的启动子区有E.coli的Zur-box类似序列 | 第108-110页 |
| ·Zur能与锌离子平衡相关基因的启动子区结合 | 第110-113页 |
| ·带六组氨酸标签的Zur蛋白的表达与纯化 | 第110页 |
| ·锌离子平衡相关基因启动子的扩增 | 第110-111页 |
| ·Zur与锌离子平衡相关基因启动子的结合分析 | 第111-113页 |
| ·Zur与锌离子平衡相关基因启动子结合需要Zn~(2+) | 第113页 |
| ·Xcc的Zur蛋白识别两个靶序列 | 第113-115页 |
| ·Xcc的Zur蛋白结合在锌离子平衡相关基因启动子的-10和-35区 | 第115-118页 |
| ·XC2976启动子的反向重复序列是Zur蛋白结合和激活必需的 | 第118-121页 |
| ·突变的XC2976基因启动子与gusA基因转录融合报告质粒的构建 | 第118-120页 |
| ·Zur不能与突变的XC2976基因启动子结合从而不能激活其表达 | 第120-121页 |
| ·Zur蛋白直接调控锌离子平衡相关基因的表达 | 第121-123页 |
| ·zur突变体对Zn~(2+)的敏感性是由于排放泵功能缺失而不是由于吸收系统组成型表达引起的 | 第123-124页 |
| ·Xcc中锌离子平衡相关基因与致病性及EPS产生无关 | 第124-125页 |
| ·小结 | 第125-127页 |
| 第六章 十字花科黑腐病菌中Zur通过hrpX调控hrp基因的表达 | 第127-140页 |
| ·引言 | 第127页 |
| ·hrp基因启动子与gusA基因转录融合报告质粒的构建 | 第127-131页 |
| ·Zur通过hrpX调控hrp基因的表达 | 第131-132页 |
| ·组成型表达的hrpX部分恢复zur突变体的致病力而完全恢复zur突变体的HR | 第132-137页 |
| ·组成型表达的hrpX和hrpG的构建 | 第132-135页 |
| ·组成型表达的hrpX部分恢复zur突变体的致病力 | 第135页 |
| ·组成型表达的hrpX完全恢复zur突变体的HR | 第135-136页 |
| ·组成型表达的hrpX恢复zur突变体中hrp基因的mRNA水平 | 第136-137页 |
| ·组成型表达的hrpX不影响zur突变体的EPS产量和Zn~(2+)敏感性 | 第137-138页 |
| ·Zur可能间接调控hrpX的表达 | 第138-139页 |
| ·小结 | 第139-140页 |
| 第七章 结论与讨论 | 第140-145页 |
| 参考文献 | 第145-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 攻读博士学位期间完成的研究论文 | 第164页 |
