| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1 文昌鱼 | 第14-21页 |
| ·文昌鱼概述 | 第14-18页 |
| ·文昌鱼是分子发育进化生物学模式动物 | 第18-19页 |
| ·文昌鱼的分子生物学研究 | 第19-21页 |
| ·文昌鱼基因的克隆 | 第19页 |
| ·文昌鱼与比较基因组学和进化 | 第19-21页 |
| 2 抗凝血酶研究进展 | 第21-27页 |
| ·AT 的蛋白质结构 | 第22-23页 |
| ·AT 与肝素的结合 | 第23-24页 |
| ·AT 的RCL 结构中心 | 第24-25页 |
| ·AT 的合成及水解失活 | 第25页 |
| ·AT 的基因结构及体外表达 | 第25-26页 |
| ·AT 的分类与进化 | 第26-27页 |
| 3 研究目的和技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章 BBAT 基因全长的克隆及序列分析 | 第29-48页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-38页 |
| ·材料和试剂 | 第29-30页 |
| ·成体文昌鱼 | 第29页 |
| ·实验试剂及配制方法 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-38页 |
| ·文昌鱼总RNA 的分离 | 第30-31页 |
| ·BbAT 基因全长的克隆 | 第31-37页 |
| ·序列比较与系统进化分析 | 第37页 |
| ·结构预测 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-48页 |
| ·文昌鱼总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·BbAT 的序列和结构 | 第38-47页 |
| ·BbAT 基因保守片段的PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·3’RACE 扩增文昌鱼BbAT 基因的3’cDNA 末端 | 第39页 |
| ·5’RACE 扩增文昌鱼BbAT 基因的5’cDNA 末端 | 第39-40页 |
| ·序列分析 | 第40-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 BBAT 基因在文昌鱼成体中的组织表达 | 第48-58页 |
| 1 前言 | 第48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-54页 |
| ·RNA 探针的合成和标记效率检测 | 第48-51页 |
| ·切片原位杂交分析BbAT 基因在各组织中的表达 | 第51-54页 |
| ·文昌鱼材料固定 | 第51-52页 |
| ·文昌鱼组织块的包埋 | 第52页 |
| ·载玻片的处理 | 第52页 |
| ·切片 | 第52页 |
| ·脱蜡复水 | 第52页 |
| ·处理及杂交 | 第52-54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 BBAT 基因的体外重组表达及功能研究 | 第58-86页 |
| 1 前言 | 第58-59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-77页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第59-69页 |
| ·BbAT 在大肠杆菌中的表达 | 第59-68页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第68页 |
| ·抗体的特异性的Western blot 检测 | 第68-69页 |
| ·BbAT 基因的毕赤酵母表达 | 第69-75页 |
| ·菌株与质粒 | 第69-70页 |
| ·酵母表达和纯化中的培养基和主要试剂的配制 | 第70-71页 |
| ·pPICZαA/BbAT 真核表达载体的构建及鉴定 | 第71页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第71-74页 |
| ·BbAT 在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第74-75页 |
| ·发色底物法检测rBbAT 活性 | 第75-76页 |
| ·BbAT-目标酶复合物检测 | 第76-77页 |
| ·样品与试剂 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-77页 |
| 3 结果与讨论 | 第77-86页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第77-79页 |
| ·BbAT 基因ORF 的PCR 扩增 | 第77页 |
| ·pET28a-BbAT 表达载体的构建 | 第77-78页 |
| ·重组pET28a-BbAT 在大肠杆菌中的表达、纯化 | 第78-79页 |
| ·多克隆抗体制备及Western blot 检测 | 第79页 |
| ·BbAT 在酵母中的表达 | 第79-83页 |
| ·载体的构建和鉴定 | 第79-80页 |
| ·Mut+的鉴定 | 第80-81页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第81-83页 |
| ·发色底物法检测rBbAT 活性 | 第83-84页 |
| ·BbAT-目标酶复合物的检测 | 第84-86页 |
| 总结与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
| 发表的学术论文 | 第95页 |
