| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第14-19页 |
| ·PRRS概述 | 第14-16页 |
| ·PRRS的流行病学 | 第16页 |
| ·PRRSV分子生物学特征 | 第16-18页 |
| ·PRRSV致病机制 | 第18-19页 |
| ·PRRSV的疫苗与防治 | 第19页 |
| 2 基因的差异表达 | 第19-27页 |
| ·差异表达 | 第19-20页 |
| ·筛选差异基因的方法进展 | 第20-23页 |
| ·消减杂交(SH) | 第20-21页 |
| ·差异显示PCR技术(DDRT-PCR) | 第21页 |
| ·基因芯片技术(DNA chip technique) | 第21-22页 |
| ·基因表达连续分析(SAGE) | 第22-23页 |
| ·SSH概述 | 第23-25页 |
| ·SSH优缺点 | 第25-27页 |
| ·SSH的应用 | 第27页 |
| 3 研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后猪肺泡巨噬细胞的差异表达基因的研究 | 第29-58页 |
| 1 材料和方法 | 第30-41页 |
| ·毒株、细胞和菌株 | 第30页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·主要试剂与药品 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·HP-PRRSV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第31-33页 |
| ·阳性标准品的制备 | 第31-32页 |
| ·反应体系与条件的优化 | 第32页 |
| ·标准曲线的建立 | 第32页 |
| ·特异性试验 | 第32页 |
| ·敏感性试验 | 第32页 |
| ·重复性试验 | 第32-33页 |
| ·HP-PRRSV在猪体内复制动力学曲线的研究 | 第33页 |
| ·PAM细胞的制备 | 第33页 |
| ·接毒并检测病毒含量 | 第33页 |
| ·绘制病毒复制动力学曲线 | 第33页 |
| ·HP-PRRSV感染PAM细胞后差异表达基因文库的建立 | 第33-35页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·cDNA的合成 | 第34页 |
| ·cDNA的酶切消化 | 第34页 |
| ·cDNA片段与接头的连接 | 第34-35页 |
| ·正向、反向消减杂交 | 第35页 |
| ·差异基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·差异基因文库的克隆化及文库片段多样性分析 | 第35页 |
| ·Southern blot鉴定差异表达基因文库的效率 | 第35-37页 |
| ·样品的制备 | 第36页 |
| ·探针的制备 | 第36页 |
| ·杂交 | 第36-37页 |
| ·杂交结果的判定 | 第37页 |
| ·阳性差异表达基因序列的测定与注释、序列分析和引物设计 | 第37页 |
| ·动物实验 | 第37页 |
| ·差异表达基因SYBR Green Ⅰ相对荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第37-41页 |
| ·内参GAPDH荧光定量PCR方法的建立 | 第37-38页 |
| ·目的基因荧光定量PCR方法的建立 | 第38-40页 |
| ·待检目的样品的制备 | 第40-41页 |
| ·目的基因的检测 | 第41页 |
| ·结果分析 | 第41页 |
| ·网络分析 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-53页 |
| ·HP-PRRSV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第41-44页 |
| ·荧光定量PCR反应的条件优化 | 第41页 |
| ·标准曲线的建立 | 第41-42页 |
| ·特异性试验结果 | 第42页 |
| ·敏感性试验结果 | 第42-43页 |
| ·重复性试验结果 | 第43-44页 |
| ·HP-PRRSV在猪体内复制动力学曲线的获得 | 第44页 |
| ·HP-PRRSV感染PAM细胞后差异表达基因文库的获得 | 第44-46页 |
| ·酶切效率分析 | 第44-45页 |
| ·接头的连接效果 | 第45页 |
| ·两轮PCR的结果分析 | 第45页 |
| ·文库的cDNA片段多样性分析 | 第45-46页 |
| ·差异表达基因文库效率的获得 | 第46页 |
| ·差异表达基因序列的获得 | 第46-49页 |
| ·差异表达基因SYBR Green Ⅰ相对荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第49-51页 |
| ·标准曲线的建立 | 第49-50页 |
| ·目的基因标准曲线的建立 | 第50页 |
| ·差异基因相对表达结果 | 第50-51页 |
| ·差异基因网络分析 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-58页 |
| 第三章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68-69页 |
