| 内容提要 | 第1-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-28页 |
| ·研究目的、意义及内容 | 第10-13页 |
| ·研究目的 | 第10-12页 |
| ·研究意义 | 第12页 |
| ·研究内容 | 第12-13页 |
| ·人参皂苷的生物合成 | 第13-15页 |
| ·人参皂苷生物合成步骤 | 第13-14页 |
| ·人参皂苷生物合成调控 | 第14-15页 |
| ·人参皂苷生物合成关键酶基因 | 第15-21页 |
| ·人参皂苷生物合成上游关键酶基因—焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因（MVD） | 第15-16页 |
| ·焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因（MVD）结构特点 | 第15-16页 |
| ·焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因（MVD）功能分析 | 第16页 |
| ·人参皂苷合成下游关键酶基因βAS的研究 | 第16-19页 |
| ·β-香树素合成酶基因（βAS）结构特点 | 第16-17页 |
| ·β-香树素合成酶基因（βAS）突变对活性影响 | 第17-18页 |
| ·β-香树素合成酶基因（βAS）同源酶基因 | 第18-19页 |
| ·人参皂苷生物合成其他关键酶基因 | 第19-21页 |
| ·人参皂苷生物合成关键酶基因—3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因（HMGR） | 第19-20页 |
| ·人参皂苷生物合成关键酶基因—鲨烯合成酶基因（SS） | 第20页 |
| ·人参皂苷生物合成关键酶基因—鲨烯环氧酶基因（SE） | 第20-21页 |
| ·发根农杆菌介导的植物遗传转化 | 第21-23页 |
| ·遗传转化外源基因资源 | 第21-22页 |
| ·基因rol对人参发根诱导的作用 | 第22页 |
| ·人参发根植株再生 | 第22-23页 |
| ·反义RNA技术在植物中的研究进展 | 第23-28页 |
| ·调控次生代谢产物 | 第24页 |
| ·调控果实成熟 | 第24-25页 |
| ·改良作物品质 | 第25-27页 |
| ·改变植物花色 | 第27-28页 |
| 第2章 人参皂苷生物合成上游基因MVD的克隆 | 第28-60页 |
| ·材料与方法 | 第29-41页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·载体、菌株与引物 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| ·人参发根总RNA的三种不同方法提取 | 第31-32页 |
| ·人参MVD保守片段的克隆 | 第32-34页 |
| ·3’RACE扩增人参MVD的3’端片段 | 第34-35页 |
| ·5’RACE扩增人参MVD的5’端片段 | 第35-37页 |
| ·人参MVD的全长ORF扩增 | 第37-38页 |
| ·人参MVD基因的生物信息学分析 | 第38页 |
| ·人参MVD基因的原核表达 | 第38-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-56页 |
| ·三种提取人参发根总RNA方法的比较 | 第41-43页 |
| ·人参MVD基因克隆及序列分析 | 第43-51页 |
| ·中间保守序列的扩增结果 | 第43-45页 |
| ·人参MVD的3’RACE扩增结果 | 第45-47页 |
| ·人参MVD的5’RACE扩增结果 | 第47-48页 |
| ·人参MVD全长ORF的扩增结果 | 第48-51页 |
| ·人参MVD蛋白的特征分析 | 第51-52页 |
| ·人参MVD蛋白的三维模型分析 | 第52-53页 |
| ·人参MVD基因的系统发生树分析 | 第53-54页 |
| ·人参MVD原核表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·人参MVD的原核表达 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·RNA提取 | 第56页 |
| ·保守片段的兼并引物设计 | 第56-57页 |
| ·克隆MVD基因的方法 | 第57页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·MVD原核表达 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第3章 反义βAS植物表达载体及其工程菌的构建 | 第60-78页 |
| ·材料与方法 | 第61-66页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·植物材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-66页 |
| ·RNA的提取 | 第61页 |
| ·反转录 | 第61-62页 |
| ·βAS基因cDNA的克隆 | 第62-63页 |
| ·受体菌株的选择 | 第63页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·PCR-Southern Blot 分析 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-74页 |
| ·β-香树素合成酶基因扩增 | 第66-67页 |
| ·克隆载体的酶切和质粒测序 | 第67-68页 |
| ·测序结果分析 | 第68-69页 |
| ·受体菌株的选择 | 第69-70页 |
| ·反义βAS植物表达载体（pBI-AβAS、pROK-AβAS和pCAMBIA 3 301-AβAS）的构建及酶切鉴定 | 第70-73页 |
| ·反义βAS工程菌发根农杆菌A4 的PCR-Southern杂交鉴定 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·βAS基因的反义表达载体构建 | 第74-75页 |
| ·反义表达载体选择 | 第75页 |
| ·农杆菌冻融法转化及质粒提取 | 第75-76页 |
| ·含βAS三种重组发根农杆菌的PCR-Southern杂交鉴定 | 第76页 |
| ·人参βAS 基因研究 | 第76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第4章 反义βAS发根农杆菌对人参的遗传转化及其对人参皂苷含量的影响 | 第78-100页 |
| ·材料和方法 | 第79-84页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·植物材料 | 第79页 |
| ·试剂及培养基 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-84页 |
| ·人参根外植体消毒和接种 | 第79-80页 |
| ·GUS瞬时表达检测 | 第80页 |
| ·反义βAS发根农杆菌转化人参条件研究 | 第80-81页 |
| ·Southern blot分析 | 第81-82页 |
| ·Northern blot分析 | 第82页 |
| ·人参皂苷含量分析 | 第82-83页 |
| ·DAS和βAS酶活分析 | 第83页 |
| ·2,3-氧化鲨烯含量分析 | 第83页 |
| ·反义βAS人参发根A19 的达玛烷皂苷含量分析 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-94页 |
| ·反义βAS发根农杆菌转化人参条件研究 | 第84-88页 |
| ·农杆菌 A4 (pCAMBIA3301-AβAS, pROK-AβAS,pBI121-AβAS) 侵染结果 | 第84页 |
| ·农杆菌 A4 (pBI121-AβAS)不同浓度及侵染时间 | 第84-85页 |
| ·预培养、共培养对人参转化的影响 | 第85-86页 |
| ·添加AS对人参转化的影响 | 第86-88页 |
| ·反义βAS诱导人参发根的结果 | 第88页 |
| ·反义βAS人参发根的Southern blot鉴定 | 第88-89页 |
| ·反义βAS人参发根的Northern blot鉴定 | 第89-90页 |
| ·反义βAS发根中齐敦果烷型人参皂苷R B0B的含量分析 | 第90页 |
| ·DAS和βAS酶活分析 | 第90-91页 |
| ·反义βAS发根中2，3-氧化鲨烯分析和达玛烷人参皂苷HPLC分析 | 第91-92页 |
| ·反义βAS发根系A19 培养过程中达玛烷皂苷含量变化 | 第92-94页 |
| ·讨论 | 第94-98页 |
| ·影响转化的因素 | 第95页 |
| ·转反义βAS对人参生长的影响 | 第95-96页 |
| ·转反义βAS人参发根的Southern、Northern杂交分析 | 第96-97页 |
| ·转反义βAS对人参皂苷合成酶的影响 | 第97页 |
| ·转反义βAS对达玛烷型人参皂苷的影响 | 第97-98页 |
| ·小结 | 第98-100页 |
| 第5章 全文总结与展望 | 第100-102页 |
| ·总结 | 第100页 |
| ·展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 英文缩写 | 第115-116页 |
| 发表文章 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 中文摘要 | 第118-121页 |
| Abstract | 第121-123页 |
