摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-10页 |
引言 | 第10-25页 |
一、文献综述 | 第10-23页 |
(一) 糖鞘脂Gb3 概述 | 第10-12页 |
(二) 志贺毒素与糖鞘脂Gb3 之间的相互作用 | 第12-18页 |
(三) 志贺毒素的细胞内运输 | 第18-20页 |
(四) Gb3 的细胞内运输 | 第20-23页 |
二、目前的研究概况 | 第23-24页 |
三、本论文的研究内容与意义 | 第24-25页 |
材料与方法 | 第25-43页 |
一、材料 | 第25-28页 |
(一) 细胞 | 第25页 |
(二) 质粒 | 第25页 |
(三) 菌株 | 第25页 |
(四) 抗体 | 第25页 |
(五) 主要试剂和试剂盒 | 第25-26页 |
(六) 主要仪器 | 第26-28页 |
二、方法 | 第28-43页 |
(一) 一般实验方法 | 第28-34页 |
(二) pSU108-W34A、pSU108-D17E、pSU108-F30A 重组质粒的构建 | 第34-40页 |
(三) 野生型蛋白 STxB 和重组蛋白 W34A、D17E、F30A 的诱导表达、提取、鉴定及纯化 | 第40-41页 |
(四) 免疫荧光检测配体的胞内运输 | 第41-43页 |
结果 | 第43-65页 |
一、研究 STxB 突变体的胞吞途径 | 第43-62页 |
(一) pSU108-W34A/DH5α、pSU108-D17E/DH5α、pSU108-F30A/DH5α 重组质粒的构建 | 第43-48页 |
(二) 野生型蛋白STxB 和重组蛋白W34A、D17E、F30A 的表达、鉴定及纯化 | 第48-55页 |
(三) 免疫荧光检测STxB、W34A、D17E、F30A 的胞内运输 | 第55-62页 |
二、比较不同配体的胞吞途径 | 第62-65页 |
(一) 在细胞膜表面的结合情况 | 第62页 |
(二) 定位于EE/RE 情况 | 第62-63页 |
(三) Gb3 抗体38-13 能否进入HeLa? | 第63-65页 |
讨论 | 第65-67页 |
一、突变体蛋白的制备与纯化 | 第65页 |
(一) 蛋白提取方法的选择(渗透休克法) | 第65页 |
(二) 蛋白纯化方式的选择(离子交换层析) | 第65页 |
二、研究 STxB 突变体的胞吞途径 | 第65-66页 |
(一) 无需15 个位点全结合就能发生内化 | 第65页 |
(二) STxB 的胞内运输依赖于 STxB-Gb3 复合物的稳定作用 | 第65-66页 |
三、比较不同配体的胞吞途径 | 第66-67页 |
结论 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-73页 |
致谢 | 第73页 |