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马立克氏病病毒野毒株GX0101及其基因敲除株BAC克隆生物学活性的比较研究

中文摘要第1-17页
英文摘要第17-23页
1 文献综述第23-46页
   ·马立克氏病病毒(MDV)研究进展第23-33页
     ·病原学第23-24页
     ·流行病学第24-25页
     ·发病机理及病理变化第25-28页
     ·诊断技术第28-30页
     ·疾病防制策略第30-33页
   ·马立克氏病病毒的致病型第33-34页
   ·马立克氏病病毒的基因组结构第34-36页
   ·禽反转录病毒与DNA病毒间的基因重组第36-38页
     ·病毒的变异方式第36页
     ·MDV 与REV 间的基因重组第36-37页
     ·MDV 与ALV 间的基因重组第37页
     ·禽反转录病毒与DNA病毒间的基因重组的发生机制第37-38页
   ·不同病毒间遗传重组的流行病学意义第38页
   ·DNA 片段克隆的载体系统第38-41页
     ·质粒第38-39页
     ·粘粒第39-40页
     ·BAC 的优势及其发展第40-41页
   ·操纵MDV 基因:依靠细菌人工染色体新技术第41-44页
     ·RecA 蛋白介导的同源重组第41页
     ·RecE/T 蛋白介导的同源重组第41-44页
   ·本研究的意义第44-46页
2 一株整合有 REV 长末端重复序列的 MDV 的致病性研究第46-63页
   ·材料和方法第47-49页
     ·材料第47页
       ·蛋鸡、SPF 鸡和SPF 动物设施第47页
       ·病毒与鸡胚第47页
       ·疫苗第47页
       ·主要仪器第47页
     ·方法第47-49页
       ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第47-48页
       ·病毒的增殖与定量第48页
       ·MDV 人工攻毒第48页
       ·NDV 和AIV 油乳灭活苗的免疫和免疫反应的测定第48页
       ·MDV 感染对体重的影响第48-49页
       ·接种 MDV 的海蓝褐公鸡的死亡率及肿瘤发生率第49页
       ·MDV 感染影响免疫器官发育的比较方法第49页
       ·病理学检测第49页
       ·统计学分析第49页
   ·结果第49-60页
     ·GX0101 毒株感染对鸡生长性能的影响第49-51页
       ·对海蓝褐公鸡的影响第49-50页
       ·对SPF 鸡的影响第50-51页
     ·GX0101 毒株感染对NDV 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第51-53页
       ·对海蓝褐公鸡的影响第51-52页
       ·对SPF 鸡的影响第52-53页
     ·GX0101 毒株感染对 AIV-H5 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第53-55页
       ·对海蓝褐公鸡的影响第53-54页
       ·对SPF 鸡的影响第54-55页
     ·GX0101 毒株感染对 AIV-H9 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第55-57页
       ·对海蓝褐公鸡的影响第55-56页
       ·对SPF 鸡的影响第56-57页
     ·GX0101 毒株感染后对中枢免疫器官的影响第57-58页
     ·接种 MDV 的鸡的死亡率及肿瘤发生率第58-60页
       ·对海蓝褐公鸡的死亡率及肿瘤发生率第58页
       ·对SPF 鸡的死亡率及肿瘤发生率第58-60页
   ·讨论第60-63页
3 带有 REV-LTR 片段的 MDV 野毒株 GX0101 的BAC 克隆的构建及拯救病毒的致病性分析第63-83页
   ·材料与方法第64-71页
     ·材料第64-65页
       ·病毒第64页
       ·相关试剂第64-65页
       ·动物及疫苗第65页
     ·方法第65-71页
       ·构建感染性 BAC 分子克隆化病毒的技术路线第65页
       ·重组转基因载体质粒 pDS-pHAI-US2 的构建第65-67页
       ·GX0101-BAC 克隆的构建及鉴定第67-70页
       ·重组病毒的拯救及间接免疫荧光试验第70-71页
       ·BAC 克隆毒bac-GX0101 与亲本毒GX0101 致病性比较第71页
   ·结果与分析第71-80页
     ·质粒 pDS-pHAI-US2第71-73页
     ·GX0101-BAC 克隆的鉴定第73-74页
     ·拯救的重组病毒的鉴定第74-75页
     ·IFA 检测重组病毒bac-GX0101第75页
     ·对增重的影响第75-76页
     ·对 NDV 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第76-77页
     ·对AIV-H5 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第77-78页
     ·对AIV-H9 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第78-79页
     ·致肿瘤性以及死亡率第79页
     ·GX0101、bac-GX0101 株感染对 SPF 鸡的病理组织学检测第79-80页
   ·讨论第80-83页
4 马立克氏病病毒野毒株 GX0101 的 LTR 序列敲除及其生物学特性比较第83-111页
   ·材料与方法第84-92页
     ·材料第84-85页
       ·细胞与病毒第84页
       ·相关试剂第84-85页
       ·动物及疫苗第85页
     ·方法第85-92页
       ·卡那霉素抗性基因的扩增第85-86页
       ·REV-LTR 序列的敲除第86-87页
       ·GX0101△LT R-BAC DNA 的鉴定第87-88页
       ·PCR产物序列的比较与分析第88页
       ·GX0101△LT R-BAC DNA 的提取第88-89页
       ·重组病毒的拯救第89-90页
       ·间接免疫荧光法(IFA)检测拯救的重组病毒bac-GX0101△LTR第90页
       ·MDV 毒人工感染方法第90页
       ·MDV 感染对体重的影响第90页
       ·对 NDV 和 AIV 油乳灭活苗的免疫后的免疫抑制性的比较第90页
       ·斑点杂交检测 bac-GX0101 毒株与 bac-GX0101△LTR 毒株的横向传播能力第90-91页
       ·病毒血症的检测第91-92页
   ·结果第92-108页
     ·卡那霉素的特异性扩增第92页
     ·敲除GX0101 株中整合的REV-LTR 序列第92-93页
     ·PCR 产物的序列测定与分析第93-97页
     ·拯救病毒 bac-GX0101△LTR第97-98页
     ·对增重的影响第98-99页
     ·对 NDV 疫苗免疫抗体反应的抑制作用第99页
     ·对 AIV-H9 疫苗免疫抗体反应的抑制作用第99-101页
     ·间接免疫荧光法(IFA)检测 MDV 病毒血症水平第101-102页
     ·MDV-pp38 核酸探针灵敏度及特异性检测第102-103页
     ·斑点分子杂交检测感染鸡的羽毛囊中的 MDV第103页
     ·bac-GX0101 毒株与bac-GX0101△LTR 毒株横向传播能力的比较第103-108页
     ·两株 MDV 诱发鸡的死亡率和肿瘤发生率比较第108页
   ·讨论第108-111页
5 马立克氏病病毒 ICP4 基因功能的研究第111-125页
   ·材料与方法第111-116页
     ·材料第111-112页
       ·细胞与病毒第111-112页
       ·相关试剂第112页
       ·动物及疫苗第112页
     ·方法第112-116页
       ·卡那霉素抗性基因的扩增第113页
       ·ICP4 基因的敲除第113-114页
       ·GX0101 △ICP4 -BAC DNA 的鉴定第114-115页
       ·PCR 产物序列的比较与分析第115页
       ·GX0101△ICP4 -BAC DNA 的提取第115页
       ·重组病毒的拯救第115-116页
       ·间接免疫荧光法(IFA)检测拯救的重组病毒bac-GX0101△ICP4第116页
       ·bac-GX0101 △ICP4 与bac-GX0101 致病性比较第116页
   ·结果与分析第116-123页
     ·敲除MDV 毒株中的ICP4 基因第116-117页
     ·PCR 产物的序列测定与分析第117-119页
     ·拯救bac-GX0101△ICP4第119页
     ·IFA第119-120页
     ·对增重的影响第120页
     ·对 NDV 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第120-121页
     ·对 AIV-H5 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第121页
     ·对 AIV-H9 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第121-123页
     ·致死率与致肿瘤性第123页
   ·讨论第123-125页
6 马立克氏病毒1.8-kb mRNA 基因的潜在阅读框A和C的敲除及其功能研究第125-139页
   ·材料与方法第126-130页
     ·材料第126-127页
       ·病毒第126页
       ·相关试剂第126-127页
       ·动物及疫苗第127页
     ·方法第127-130页
       ·GX0101△(A+C) -BAC的构建第127-128页
       ·GX0101△(A+C) -BAC DNA 的鉴定第128页
       ·GX0101 △(A+C) -BAC DNA 拯救病毒生长特性的测定第128-129页
       ·ORF(A+C)对双向启动子活性的影响第129页
       ·bac-GX0101△(A+C) 与bac-GX0101 致病性比较第129-130页
   ·结果第130-137页
     ·1.8kb-m RNA 中ORF(A+C)缺失株的构建第130-132页
     ·1.8kb-mRNA 中 ORF(A+C)对双向启动子活性的影响第132-133页
     ·对增重的影响第133-134页
     ·对 NDV 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第134页
     ·对 AIV-H5 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第134-135页
     ·对 AIV-H9 疫苗免疫后抗体反应的抑制作用第135-136页
     ·致肿瘤性第136-137页
   ·讨论第137-139页
结论第139-140页
创新之处第140-141页
参考文献第141-154页
致谢第154-155页
读博士学位期间发表、录用(或起草)论文第155页

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