| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 引言 | 第13页 |
| 2 HRP基因及HARPIN蛋白概述 | 第13-18页 |
| ·HRP基因的结构与特点 | 第14页 |
| ·HARPIN蛋白的结构与特点 | 第14-15页 |
| ·HARPIN蛋白的生物学效应 | 第15-18页 |
| ·Harpin蛋白引起植物过敏反应 | 第16页 |
| ·Harpins能诱导植物获得系统抗性 | 第16-17页 |
| ·Harpin蛋白能刺激植物生长发育 | 第17页 |
| ·编码harpin蛋白的hrp基因在分子育种中的作用 | 第17-18页 |
| ·作为诱抗剂的HARPIN蛋白应用前景 | 第18页 |
| 3 大肠杆菌高密度发酵国内外研究进展 | 第18-26页 |
| ·概述 | 第18-19页 |
| ·影响大肠杆菌高密度发酵的环境条件 | 第19-26页 |
| ·营养源 | 第19-21页 |
| ·pH值 | 第21页 |
| ·温度 | 第21-22页 |
| ·代谢副产物 | 第22页 |
| ·溶氧浓度 | 第22-23页 |
| ·诱导剂与诱导方式 | 第23-24页 |
| ·发酵方式的研究 | 第24-26页 |
| 4 本论文的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 产HRPNECC蛋白大肠杆菌高密度摇瓶发酵条件的研究 | 第27-42页 |
| 1 材料与方法 | 第27-33页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·供试菌株及来源 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂与器材 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·高表达克隆子的筛选 | 第28-30页 |
| ·EZNA质粒提取及检测 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·高表达克隆子的筛选 | 第29-30页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第30页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第30页 |
| ·摇瓶生长曲线的绘制 | 第30页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(DE3)的摇瓶培养特性研究 | 第30-31页 |
| ·pH值 | 第30页 |
| ·接种量 | 第30页 |
| ·摇瓶装液量 | 第30-31页 |
| ·温度 | 第31页 |
| ·培养基成分的优化 | 第31-32页 |
| ·基本培养基的筛选 | 第31页 |
| ·培养基配方的优化 | 第31页 |
| ·蛋白胨/酵母提取物比例的确定 | 第31-32页 |
| ·分析方法 | 第32-33页 |
| ·细胞密度测定 | 第32页 |
| ·HrpNEcc蛋白表达量测定 | 第32页 |
| ·细胞总蛋白含量测定 | 第32-33页 |
| ·HrpNEcc蛋白质含量的测定 | 第33页 |
| 2.结果与分析 | 第33-40页 |
| ·高表达克隆子的筛选 | 第33-34页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(DE3)/PET30A(+)HRPNECC的生长曲线 | 第34页 |
| ·培养条件对菌体生长的影响 | 第34-38页 |
| ·pH值对菌体生长的影响 | 第34-35页 |
| ·接种量对菌体生长的影响 | 第35-36页 |
| ·摇瓶装液量对菌体生长的影响 | 第36-37页 |
| ·培养温度对菌体生长的影响 | 第37-38页 |
| ·培养基成分的优化 | 第38-40页 |
| ·基础培养基的筛选 | 第38页 |
| ·培养基配方的优化 | 第38-39页 |
| ·蛋白胨与酵母提取物的含量对菌体生长和蛋白产量的影响 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 诱导剂的筛选 | 第42-55页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·供试菌株及来源 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·试剂与器材 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·酵母提取物对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第43-45页 |
| ·不同培养基和不同诱导方式对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| ·TB培养基中各成分对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第44页 |
| ·TB培养基中酵母提取物(Yeast Extract,YE)含量对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第44页 |
| ·不同来源和不同浓度的YE对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| ·添加外源诱导剂乳糖对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第45页 |
| ·不同浓度乳糖对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第45页 |
| ·乳糖添加时间对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第45页 |
| 2.结果与分析 | 第45-53页 |
| ·酵母提取物YE对HRPNECC蛋白表达的影响 | 第45-50页 |
| ·不同培养基和不同诱导方式对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| ·TB培养基中各成分对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| ·TB培养基中YE含量对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第47-49页 |
| ·SDS-PAGE检测结果 | 第47页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白含量 | 第47-49页 |
| ·不同来源和浓度的YE对HrpNEcc蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE检测结果 | 第49页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白含量 | 第49-50页 |
| ·添加外源诱导剂乳糖对HRPNECC蛋白表达的影响 | 第50-53页 |
| ·乳糖浓度的确定 | 第50-52页 |
| ·乳糖添加时机的优化 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 7L发酵罐发酵条件的研究 | 第55-60页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·供试菌株及来源 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| ·试剂与器材 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-57页 |
| ·发酵方法 | 第56-57页 |
| ·蛋白农药的提取和制备 | 第57页 |
| ·破壁 | 第57页 |
| ·蛋白提取 | 第57页 |
| ·冷冻干燥 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第60-62页 |
| 1 产HRPNECC蛋白大肠杆菌摇瓶培养的优化研究 | 第60页 |
| 2 酵母提取物对HRPNECC蛋白表达的影响 | 第60-61页 |
| 3 添加外源诱导剂乳糖对HRPNECC蛋白表达量的影响 | 第61页 |
| 4 7L发酵罐高密度发酵的研究 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
