| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-26页 |
| 第一节 对虾白斑综合症病毒(WSSV)分子致病机制的研究进展 | 第13-25页 |
| 1 WSSV分子致病机制的研究进展 | 第14-20页 |
| ·囊膜蛋白及其受体的相互作用 | 第14-15页 |
| ·非结构蛋白在WSSV侵染中的作用 | 第15-16页 |
| ·WSSV的转录翻译机制 | 第16页 |
| ·WSSV的潜伏机制 | 第16-17页 |
| ·WSSV与宿主的免疫防御机制的相互作用 | 第17-20页 |
| ·WSSV感染后虾体基因和蛋白的表达变化 | 第17-18页 |
| ·抗病毒虾免疫相关基因的差异表达 | 第18页 |
| ·抗病毒免疫因子 | 第18-19页 |
| ·WSSV对凋亡机制的影响 | 第19页 |
| ·WSSV对泛素系统的影响 | 第19-20页 |
| 2. 小结与展望 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-25页 |
| 第二节 WSSV结构蛋白VP36A的相关研究进展 | 第25-26页 |
| 第二章 原核表达质粒pBADgⅢB-VP36A的构建 | 第26-39页 |
| 1 材料 | 第26页 |
| ·质粒和菌柱 | 第26页 |
| ·主要仪器和化学试剂 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-32页 |
| ·引物设计及合成 | 第26-27页 |
| ·质粒pBADgⅢB的制备 | 第27-28页 |
| ·VP36A基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·质粒与目的DNA片段的双酶切及胶回收 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌TOP10电感受态细胞的制备及电转化 | 第30页 |
| ·单克隆的随机挑取与鉴定 | 第30-32页 |
| ·VP36A及重组VP36A的生物信息学分析 | 第32页 |
| 3. 结果 | 第32-38页 |
| ·质粒pBADgⅢB的提取和VP36A基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pBADgⅢB-VP36A提取 | 第33-34页 |
| ·重组克隆的双酶切鉴定、PCR检测与DNA测序 | 第34-35页 |
| ·VP36A及重组VP36A的生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 4. 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 rVP36A的诱导表达、鉴定及纯化 | 第39-49页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·实验用菌株 | 第39页 |
| ·实验用试剂 | 第39页 |
| ·实验用仪器及设备 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-44页 |
| ·L-阿拉伯糖浓度梯度及时间梯度诱导表达 | 第39-40页 |
| ·12%SDS-PAGE电泳分析 | 第40-41页 |
| ·Western-Blot鉴定rVP36A | 第41-43页 |
| ·金属螯合亲和层析纯化rVP36A | 第43页 |
| ·rVP36A的Bradford法定量 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-48页 |
| ·L-阿拉伯糖浓度梯度及时间梯度诱导表达 | 第44-45页 |
| ·rVP36A的Western-Blot检测 | 第45-46页 |
| ·镍亲和层析及钴亲和层析纯化rVP36A | 第46-47页 |
| ·rVP36A的定量 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 VP36A小肽多克隆抗体的制备及初步鉴定 | 第49-52页 |
| 1 材料与方法 | 第49页 |
| ·VP36A小肽多克隆抗体的制备与抗体效价的检测 | 第49页 |
| ·抗体对rVP36A及WSSV中天然VP36A的Western Blot分析 | 第49页 |
| 2. 结果 | 第49-51页 |
| ·VP36A小肽多克隆抗体的制备与抗体效价的检测 | 第49页 |
| ·抗体对rVP36A及天然VP36A的Western-Blot分析 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 rVP36A与对虾鳃膜的结合活性分析 | 第52-59页 |
| 1 材料和方法 | 第52-55页 |
| ·WSSV的提取、标记及定量 | 第52-53页 |
| ·对虾鳃膜的提取及DIG标记 | 第53页 |
| ·rVP36A及BSA的FITC标记 | 第53页 |
| ·ELISA分析rVP36A与对虾鳃细胞膜的结合活性 | 第53-54页 |
| ·荧光显微镜法分析rVP36A与对虾血淋巴细胞的结合活性 | 第54-55页 |
| 2. 结果 | 第55-58页 |
| ·提取WSSV和对虾鳃膜的SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| ·提取WSSV和对虾鳃膜的的蛋白定量 | 第56页 |
| ·ELISA分析rVP36A与对虾鳃膜的结合活性 | 第56-57页 |
| ·荧光显微镜法分析rVP36A与对虾血淋巴细胞的结合活性 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 寻找与VP36A相互结合蛋白及其初步鉴定 | 第59-65页 |
| 1 材料 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| ·Biotin-VP36A为覆盖蛋白的Far-western结果 | 第60-61页 |
| ·rVP36A为覆盖蛋白的Far-western结果 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
