| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| ·本课题研究意义 | 第12页 |
| ·国内外研究概况 | 第12-18页 |
| ·硫素的结构特点 | 第13页 |
| ·硫素的功能及作用机制 | 第13-14页 |
| ·硫素的生物合成与表达调控 | 第14-15页 |
| ·硫素的应用前景及面临的问题 | 第15页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第15-17页 |
| ·傅里叶红外光谱法（FTIR）用于蛋白质二级结构的研究进展 | 第17-18页 |
| ·本课题研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 R59 中 α-硫素基因的 cDNA 克隆 | 第19-29页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·菌株和载体 | 第19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·主要仪器和设备 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要溶液及配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·总RNA 的提取和鉴定 | 第21-22页 |
| ·总RNA 的提取 | 第21页 |
| ·RNA 纯度及浓度检测 | 第21-22页 |
| ·R59 中α-硫素基因的克隆 | 第22-24页 |
| ·逆转录反应 | 第22页 |
| ·聚合酶链反应（PCR） | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增产物的胶回收 | 第23页 |
| ·感受态的制备 | 第23-24页 |
| ·连接与转化 | 第24页 |
| ·菌落PCR 鉴定与测序 | 第24页 |
| ·序列分析 | 第24页 |
| ·实验结果 | 第24-27页 |
| ·总RNA 的琼脂糖凝胶电泳结果 | 第24-25页 |
| ·R59 中α-硫素基因的克隆 | 第25页 |
| ·R59 中α-硫素基因编码蛋白的氨基酸序列分析 | 第25-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 原核表达载体的构建及其融合蛋白的表达纯化 | 第29-48页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·菌株和载体 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要溶液及配制 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33-36页 |
| ·质粒的抽提 | 第33-34页 |
| ·PCR 扩增及其产物的胶回收纯化 | 第34页 |
| ·胶回收纯化产物和载体的酶切 | 第34-35页 |
| ·酶切片段连接反应 | 第35页 |
| ·转化 | 第35页 |
| ·菌落 PCR 鉴定及测序 | 第35页 |
| ·双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第36页 |
| ·Western blotting 鉴定 | 第36-37页 |
| ·诱导表达上清中融合蛋白的纯化 | 第37页 |
| ·考马斯亮蓝 G-250 法测定纯化后的融合蛋白含量 | 第37页 |
| ·目标蛋白的获得 | 第37-39页 |
| ·实验结果 | 第39-46页 |
| ·SC、_△SC 、S_△C 、_△S_△C 的 PCR 扩增和重组质粒的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·PET-32_A(+)/SC,PET-32_A(+)/_△SC ,PET-32A(+)/S_△C ,PET-32A(+)/_△S_△C重组质粒的诱导表达 | 第40-42页 |
| ·Western blotting 鉴定 | 第42-43页 |
| ·PET-32A(+)/_△S_△C 重组质粒诱导表达破碎后的上清中融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·考马斯亮蓝 G-250 法测定纯化后的融合蛋白 PET-32A(+)/_△S_△C 的含量 | 第44-45页 |
| ·PET-32A(+)/_△S_△C 融合蛋白经过肠激酶酶切结果 | 第45页 |
| ·HPLC 分离纯化结果 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 傅里叶显微红外研究 C 末端酸性蛋白对α-硫素原核表达过程的影响 | 第48-55页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·PET-32A(+)/_△SC 包涵体的傅里叶变换红外光谱研究 | 第48-49页 |
| ·包涵体的纯化 | 第48页 |
| ·样品的制备 | 第48页 |
| ·红外光谱检测及数据分析 | 第48-49页 |
| ·PET-32A(+)_△SC 和 PET-32A(+)/_△S_△C 全细胞的傅里叶显微红外光谱研究 | 第49页 |
| ·样品的制备 | 第49页 |
| ·红外光谱检测及数据分析 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-53页 |
| ·PET-32A(+)/_△SC 包涵体的傅里叶变换红外光谱 | 第49-50页 |
| ·C 末端酸性蛋白对α-硫素原核表达过程的影响 | 第50-53页 |
| ·全细胞的FTIR 谱 | 第50-51页 |
| ·Amide I 区域聚集体的吸收位置 | 第51-52页 |
| ·在诱导表达过程中蛋白二级结构的变化 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·PET-32A(+)/_△SC 包涵体的傅里叶变换红外光谱研究 | 第53页 |
| ·C 末端酸性蛋白对α-硫素原核表达过程的影响 | 第53-55页 |
| 第五章 结论及展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 攻硕期间取得的研究成果 | 第62-63页 |
