中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-23页 |
一、鸡的生理生殖特点 | 第12页 |
二、胚胎干细胞的研究历史及现状 | 第12-17页 |
·胚胎干细胞的分离和培养 | 第13-14页 |
·鸡胚胎干细胞的离体培养体系 | 第14-16页 |
·胚胎干细胞的鉴定 | 第16-17页 |
三、嵌合体鸡的制作 | 第17-21页 |
·以X期胚盘细胞为供体的嵌合体鸡的制作 | 第17-19页 |
·以原始生殖细胞为供体的嵌合体鸡的制作 | 第19-20页 |
·鸡ES嵌合体的制作流程 | 第20-21页 |
四、嵌合体的应用 | 第21-22页 |
·在保种上的应用 | 第21页 |
·在转基因上的应用 | 第21-22页 |
五、本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
第二章 鸡X期胚盘细胞分散培养与整胚培养比较初探 | 第23-30页 |
1. 材料和方法 | 第23-24页 |
·种蛋 | 第23页 |
·主要仪器和设备 | 第23页 |
·主要试剂 | 第23页 |
·饲养层的制备 | 第23页 |
·鸡X期胚盘细胞分离培养和传代 | 第23-24页 |
·AKP活性鉴定 | 第24页 |
·阳性克隆率的观察与计算 | 第24页 |
·统计方法 | 第24页 |
2 结果与分析 | 第24-28页 |
·鸡X期胚盘细胞分散培养观察 | 第24-25页 |
·鸡X期胚盘细胞整胚培养观察 | 第25页 |
·AKP活性检测 | 第25页 |
·阳性克隆率 | 第25-28页 |
3 讨论 | 第28-30页 |
第三章 鸡X期胚盘细胞电转染外源基因条件的探索 | 第30-39页 |
1 材料和方法 | 第30-32页 |
·主要仪器和设备 | 第30页 |
·主要试剂 | 第30页 |
·鸡X期胚盘细胞分离培养和传代 | 第30页 |
·鸡X期胚盘细胞鉴定 | 第30页 |
·pEGFP-N1质粒的制备 | 第30-31页 |
·pEGFP-N1质粒电穿孔转染鸡X期胚盘细胞条件的优化 | 第31-32页 |
·存活率的观察与计算 | 第32页 |
·转染率的观察与计算 | 第32页 |
·统计方法 | 第32页 |
2 结果与分析 | 第32-37页 |
·鸡ES细胞的鉴定结果 | 第32-33页 |
·pEGFP-N1质粒电穿孔转染鸡X期胚盘细胞条件的优化结果 | 第33-37页 |
3 讨论 | 第37-39页 |
第四章 携带EGFP基因的鸡X期胚盘细胞制作嵌合体鸡模型初探 | 第39-52页 |
1 材料和方法 | 第39-42页 |
·种蛋 | 第39页 |
·主要仪器和设备 | 第39页 |
·经筛选的转基因胚胎干细胞的制备 | 第39页 |
·ES嵌合体的制备 | 第39-40页 |
·嵌合体鸡的检测 | 第40-42页 |
2 结果与分析 | 第42-52页 |
·受体种蛋不同开窗方法比较细胞 | 第42-43页 |
·显微注射不同处理方法结果 | 第43-44页 |
·肉眼观察结果 | 第44-45页 |
·DNA PCR检测 | 第45-52页 |
全文结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-60页 |
附录 | 第60-62页 |
致谢 | 第62-64页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第64-65页 |