摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略语表 | 第11-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-32页 |
1 葡萄茎沟病和栓皮病的发生、分布与危害 | 第14-16页 |
2 葡萄病毒A及葡萄病毒B研究进展 | 第16-25页 |
·寄主范围 | 第16页 |
·传播途径 | 第16-17页 |
·病毒粒子特征及细胞病理学 | 第17-18页 |
·GVA的病毒粒子特性及细胞病理学 | 第17-18页 |
·GVB的病毒粒子特性及细胞病理学 | 第18页 |
·分子生物学 | 第18-20页 |
·分类地位 | 第18页 |
·基因组结构及表达产物的功能 | 第18-20页 |
·病毒检测方法 | 第20-23页 |
·生物学检测 | 第21页 |
·血清学检测 | 第21-22页 |
·分子生物学检测 | 第22-23页 |
·病毒脱除与抗病毒基因工程 | 第23-25页 |
·GVA和GVB脱毒技术研究 | 第23-24页 |
·植物抗病毒基因工程 | 第24-25页 |
3 葡萄病毒A和葡萄病毒B的分子变异 | 第25-30页 |
·植物病毒的遗传变异和群体结构 | 第25页 |
·植物病毒分子变异及群体结构研究方法 | 第25-27页 |
·葡萄病毒A分子变异研究 | 第27-29页 |
·葡萄病毒B分子变异研究 | 第29-30页 |
4 研究目的与意义 | 第30-32页 |
第二章 来源于不同地区葡萄样品GVA及GVB的检测 | 第32-44页 |
1 材料和方法 | 第32-36页 |
·葡萄样品采集 | 第32-33页 |
·引物设计与合成 | 第33页 |
·主要试剂 | 第33页 |
·三夹心抗体ELISA | 第33-34页 |
·葡萄小量样品双链RNA提取 | 第34-35页 |
·反转录合成cDNA第一链 | 第35页 |
·PCR扩增 | 第35-36页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第36页 |
2 结果与分析 | 第36-41页 |
·部分葡萄样品GVA和GVB的TAS-ELISA检测结果 | 第36页 |
·葡萄样品GVA及GVB的RT-PCR检测结果 | 第36-41页 |
3 讨论 | 第41-44页 |
·检测效果与取材时间及部位的关系 | 第41-42页 |
·我国GVA和GVB的侵染状况 | 第42-44页 |
第三章 葡萄病毒A分子变异及群体结构研究 | 第44-69页 |
1 材料和方法 | 第45-52页 |
·试验材料 | 第45页 |
·主要试剂 | 第45页 |
·引物设计与合成 | 第45-46页 |
·葡萄小量样品双链RNA的提取 | 第46页 |
·反转录合成cDNA第一链 | 第46页 |
·PCR扩增及电泳检测 | 第46-47页 |
·PCR产物纯化回收 | 第47-48页 |
·克隆与转化 | 第48-50页 |
·转化用大肠杆菌感受态的制备 | 第48页 |
·连接 | 第48页 |
·连接产物转化 | 第48-49页 |
·质粒提取 | 第49页 |
·克隆鉴定 | 第49-50页 |
·6%PAGE凝胶电泳及结果观察 | 第50-51页 |
·SSCP电泳及结果观察 | 第51页 |
·测序及序列分析 | 第51-52页 |
2 结果与分析 | 第52-66页 |
·GVA分离物组群鉴定 | 第52-53页 |
·不同分离物GVA CP基因PCR扩增及鉴定 | 第53-54页 |
·SSCP结果分析 | 第54-60页 |
·各分离物克隆内的SSCP图谱分析 | 第54-60页 |
·优势变种的SSCP图谱分析 | 第60页 |
·GVA CP基因的核苷酸序列分析 | 第60-64页 |
·分离物内单体型间遗传距离分析 | 第60-61页 |
·分离物内的亚分离物分析 | 第61-62页 |
·GVA CP基因核苷酸系统进化树分析 | 第62-64页 |
·GVA CP基因推导的氨基酸序列分析 | 第64-66页 |
3 讨论 | 第66-69页 |
·不同SSCP方法在病毒分子变异及群体结构研究中应用的效果 | 第66页 |
·研究病毒分子变异和群体结构的材料选择 | 第66-67页 |
·我国GVA分子变异与群体结构特征 | 第67-69页 |
第四章 葡萄病毒B中国分离物分子特性研究 | 第69-90页 |
1 材料和方法 | 第69-73页 |
·试验样品及主要试剂 | 第69页 |
·引物设计与合成 | 第69-70页 |
·葡萄大量样品双链RNA的提取 | 第70-71页 |
·反转录合成cDNA第一链 | 第71页 |
·PCR扩增及电泳检测 | 第71-72页 |
·PCR产物回收、克隆与转化 | 第72页 |
·测序及序列分析 | 第72-73页 |
2 结果与分析 | 第73-87页 |
·GVB基因组3'末端片段克隆 | 第73-74页 |
·GVB基因组3'末端片段序列分析 | 第74-79页 |
·GVB ORF5核苷酸及氨基酸序列分析 | 第74-77页 |
·GVB 3'末端非翻译区序列分析 | 第77-79页 |
·GVB CP基因克隆 | 第79-81页 |
·GVB CP基因核苷酸及氨基酸序列分析 | 第81-87页 |
3 讨论 | 第87-90页 |
·GVB中国分离物ORF5和3'UTR特性 | 第87-88页 |
·GVB中国分离物CP基因特性 | 第88-90页 |
参考文献 | 第90-103页 |
附录A:主要试剂及溶液的配制 | 第103-106页 |
附录B:pMD 18-T载体信息 | 第106-107页 |
附录C:研究生在读期间已发表的文章或会议论文 | 第107-108页 |
致谢 | 第108页 |