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引起葡萄皱木复合症的两种线形病毒的分子特性研究

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略语表第11-14页
第一章 文献综述第14-32页
 1 葡萄茎沟病和栓皮病的发生、分布与危害第14-16页
 2 葡萄病毒A及葡萄病毒B研究进展第16-25页
   ·寄主范围第16页
   ·传播途径第16-17页
   ·病毒粒子特征及细胞病理学第17-18页
     ·GVA的病毒粒子特性及细胞病理学第17-18页
     ·GVB的病毒粒子特性及细胞病理学第18页
   ·分子生物学第18-20页
     ·分类地位第18页
     ·基因组结构及表达产物的功能第18-20页
   ·病毒检测方法第20-23页
     ·生物学检测第21页
     ·血清学检测第21-22页
     ·分子生物学检测第22-23页
   ·病毒脱除与抗病毒基因工程第23-25页
     ·GVA和GVB脱毒技术研究第23-24页
     ·植物抗病毒基因工程第24-25页
 3 葡萄病毒A和葡萄病毒B的分子变异第25-30页
   ·植物病毒的遗传变异和群体结构第25页
   ·植物病毒分子变异及群体结构研究方法第25-27页
   ·葡萄病毒A分子变异研究第27-29页
   ·葡萄病毒B分子变异研究第29-30页
 4 研究目的与意义第30-32页
第二章 来源于不同地区葡萄样品GVA及GVB的检测第32-44页
 1 材料和方法第32-36页
   ·葡萄样品采集第32-33页
   ·引物设计与合成第33页
   ·主要试剂第33页
   ·三夹心抗体ELISA第33-34页
   ·葡萄小量样品双链RNA提取第34-35页
   ·反转录合成cDNA第一链第35页
   ·PCR扩增第35-36页
   ·琼脂糖凝胶电泳检测第36页
 2 结果与分析第36-41页
   ·部分葡萄样品GVA和GVB的TAS-ELISA检测结果第36页
   ·葡萄样品GVA及GVB的RT-PCR检测结果第36-41页
 3 讨论第41-44页
   ·检测效果与取材时间及部位的关系第41-42页
   ·我国GVA和GVB的侵染状况第42-44页
第三章 葡萄病毒A分子变异及群体结构研究第44-69页
 1 材料和方法第45-52页
   ·试验材料第45页
   ·主要试剂第45页
   ·引物设计与合成第45-46页
   ·葡萄小量样品双链RNA的提取第46页
   ·反转录合成cDNA第一链第46页
   ·PCR扩增及电泳检测第46-47页
   ·PCR产物纯化回收第47-48页
   ·克隆与转化第48-50页
     ·转化用大肠杆菌感受态的制备第48页
     ·连接第48页
     ·连接产物转化第48-49页
     ·质粒提取第49页
     ·克隆鉴定第49-50页
   ·6%PAGE凝胶电泳及结果观察第50-51页
   ·SSCP电泳及结果观察第51页
   ·测序及序列分析第51-52页
 2 结果与分析第52-66页
   ·GVA分离物组群鉴定第52-53页
   ·不同分离物GVA CP基因PCR扩增及鉴定第53-54页
   ·SSCP结果分析第54-60页
     ·各分离物克隆内的SSCP图谱分析第54-60页
     ·优势变种的SSCP图谱分析第60页
   ·GVA CP基因的核苷酸序列分析第60-64页
     ·分离物内单体型间遗传距离分析第60-61页
     ·分离物内的亚分离物分析第61-62页
     ·GVA CP基因核苷酸系统进化树分析第62-64页
   ·GVA CP基因推导的氨基酸序列分析第64-66页
 3 讨论第66-69页
   ·不同SSCP方法在病毒分子变异及群体结构研究中应用的效果第66页
   ·研究病毒分子变异和群体结构的材料选择第66-67页
   ·我国GVA分子变异与群体结构特征第67-69页
第四章 葡萄病毒B中国分离物分子特性研究第69-90页
 1 材料和方法第69-73页
   ·试验样品及主要试剂第69页
   ·引物设计与合成第69-70页
   ·葡萄大量样品双链RNA的提取第70-71页
   ·反转录合成cDNA第一链第71页
   ·PCR扩增及电泳检测第71-72页
   ·PCR产物回收、克隆与转化第72页
   ·测序及序列分析第72-73页
 2 结果与分析第73-87页
   ·GVB基因组3'末端片段克隆第73-74页
   ·GVB基因组3'末端片段序列分析第74-79页
     ·GVB ORF5核苷酸及氨基酸序列分析第74-77页
     ·GVB 3'末端非翻译区序列分析第77-79页
   ·GVB CP基因克隆第79-81页
   ·GVB CP基因核苷酸及氨基酸序列分析第81-87页
 3 讨论第87-90页
   ·GVB中国分离物ORF5和3'UTR特性第87-88页
   ·GVB中国分离物CP基因特性第88-90页
参考文献第90-103页
附录A:主要试剂及溶液的配制第103-106页
附录B:pMD 18-T载体信息第106-107页
附录C:研究生在读期间已发表的文章或会议论文第107-108页
致谢第108页

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