| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 甘油磷脂酰胆碱 | 第9-11页 |
| 1.1.1 甘油磷脂酰胆碱的简介 | 第9页 |
| 1.1.2 甘油磷脂酰胆碱的生理功能 | 第9-10页 |
| 1.1.3 甘油磷脂酰胆碱制备的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 植物油脱胶技术 | 第11-14页 |
| 1.2.1 植物油中的磷脂概述 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物油中水化磷脂和非水化磷脂 | 第12页 |
| 1.2.3 植物油脱胶的类型和特点 | 第12-14页 |
| 1.3 磷脂酶B概况 | 第14-16页 |
| 1.3.1 磷脂酶B的简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 磷脂酶B的来源 | 第15页 |
| 1.3.3 磷脂酶B表达及酶学性质研究 | 第15页 |
| 1.3.4 磷脂酶B的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第16-18页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第17页 |
| 1.4.2 外源目的蛋白在毕赤酵母中表达的影响因素 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题的研究意义及内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 本课题的研究意义 | 第18-19页 |
| 1.5.2 本课题的主要研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.4 溶液 | 第22-23页 |
| 2.1.5 仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.2.1 磷脂酶B基因的获得 | 第23-26页 |
| 2.2.2 毕赤酵母表达载体pPIC9K-plb的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3 毕赤酵母重组菌株GS115/pPIC9K-plb的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.4 毕赤酵母工程菌株的发酵培养 | 第32-33页 |
| 2.2.5 磷脂酶B酶活测定 | 第33页 |
| 2.2.6 毕赤酵母工程菌株发酵条件优化 | 第33-34页 |
| 2.2.7 重组磷脂酶B的纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 2.2.9 重组磷脂酶B酶学性质的研究 | 第36页 |
| 2.2.10 甘油磷脂酰胆碱的合成 | 第36-37页 |
| 2.2.11 重组磷脂酶B在脱胶中的应用 | 第37-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-59页 |
| 3.1 磷脂酶B基因的获得 | 第39-40页 |
| 3.1.1 酿酒酵母基因组的提取 | 第39页 |
| 3.1.2 磷脂酶B基因的扩增 | 第39-40页 |
| 3.2 毕赤酵母重组表达质粒pPIC9K-plb的构建 | 第40-42页 |
| 3.3 毕赤酵母重组菌株GS115/pPIC9K-plb的构建 | 第42页 |
| 3.4 工程菌株GS115/pPIC9K-plb的表达 | 第42-43页 |
| 3.5 毕赤酵母工程菌株的发酵条件优化 | 第43-46页 |
| 3.5.1 甲醇添加量对GS115/pPIC9K-plb发酵产酶的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.2 装液量对GS115/pPIC9K-plb发酵产酶的影响 | 第44页 |
| 3.5.3 初始pH值对GS115/pPIC9K-plb发酵产酶的影响 | 第44-45页 |
| 3.5.4 诱导温度对GS115/pPIC9K-plb发酵产酶的影响 | 第45-46页 |
| 3.5.5 转速对GS115/pPIC9K-plb发酵产酶的影响 | 第46页 |
| 3.6 摇瓶发酵优化前后条件对比 | 第46-47页 |
| 3.7 重组磷脂酶B的纯化 | 第47页 |
| 3.8 重组磷脂酶B酶学性质的研究 | 第47-50页 |
| 3.8.1 重组磷脂酶B最适反应温度的测定 | 第47-48页 |
| 3.8.2 重组磷脂酶B最适pH的测定 | 第48-49页 |
| 3.8.3 重组磷脂酶B热稳定性的测定 | 第49页 |
| 3.8.4 重组磷脂酶BpH稳定性的测定 | 第49-50页 |
| 3.9 甘油磷脂酰胆碱的合成及优化 | 第50-55页 |
| 3.9.1 甘油磷脂酰胆碱含量的检测 | 第50-51页 |
| 3.9.2 甘油磷脂酰胆碱催化条件的优化 | 第51-55页 |
| 3.10 重组磷脂酶B在脱胶中的应用 | 第55-59页 |
| 3.10.1 温度对脱胶效果的影响 | 第55-56页 |
| 3.10.2 pH对脱胶效果的影响 | 第56-57页 |
| 3.10.3 加酶量对脱胶效果的影响 | 第57-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 5 展望 | 第60-61页 |
| 6 参考文献 | 第61-68页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
