| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第14-17页 |
| 前言 | 第17-23页 |
| 1.立题依据 | 第17-20页 |
| 1.1 如何提高栽培甘草的质量是制约甘草资源可持续发展的关键问题 | 第17页 |
| 1.2 光果甘草是研究甘草三萜类有效成分生物合成分子机制的良好实验材料 | 第17-18页 |
| 1.3 X射线辐照处理是获得优良甘草种质资源的有效途径 | 第18页 |
| 1.4 高通量RNA-Seq技术为深入研究甘草三萜类生物合成分子机制提供新方法 | 第18-20页 |
| 2.研究思路与方法 | 第20-23页 |
| 2.1 研究目标 | 第20页 |
| 2.2 研究内容 | 第20-22页 |
| 2.3 技术流程图 | 第22-23页 |
| 文献综述 | 第23-28页 |
| 3.1 甘草三萜类化合物生物合成分子机制研究现状 | 第23-24页 |
| 3.2 辐照诱变育种的研究概况 | 第24-25页 |
| 3.3 高通量RNA-Seq测序技术在药用植物中的应用现状 | 第25-28页 |
| 第一章 X射线辐照处理对甘草中18α-甘草酸及18β-甘草酸含量的影响研究 | 第28-66页 |
| 1.实验材料 | 第28-29页 |
| 1.1 植物材料 | 第28页 |
| 1.2 仪器 | 第28-29页 |
| 1.3 试剂及耗材 | 第29页 |
| 2.实验方法 | 第29-32页 |
| 2.1 甘草种子的辐照处理 | 第29页 |
| 2.2 甘草种子的播种、生长管理及采收 | 第29-30页 |
| 2.3 辐照甘草样品的分子鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 辐照甘草样品中18α-甘草酸及18β-甘草酸的含量测定 | 第31-32页 |
| 3.实验结果 | 第32-64页 |
| 3.1 辐照处理后甘草的生长及采收情况 | 第32-36页 |
| 3.2 辐照处理甘草样品的分子鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.3 18α-甘草酸与18β-甘草酸HPLC标准曲线的建立 | 第37-39页 |
| 3.4 A组乌拉尔甘草样品18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量及产量分析 | 第39-43页 |
| 3.5 A组小结 | 第43-44页 |
| 3.6 B组乌拉尔甘草样品18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量及产量分析 | 第44-49页 |
| 3.7 B组小结 | 第49-50页 |
| 3.8 C组乌拉尔甘草样品18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量及产量分析 | 第50-54页 |
| 3.9 C组小结 | 第54-55页 |
| 3.10 D组光果甘草样品18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量及产量分析 | 第55-60页 |
| 3.11 D组小结 | 第60页 |
| 3.12 E组胀果甘草样品中18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量及产量分析 | 第60-64页 |
| 3.13 E组小结 | 第64页 |
| 4.小结和讨论 | 第64-66页 |
| 第二章 三萜类化合物差异积累的光果甘草样品的转录组分析 | 第66-125页 |
| 1.实验材料 | 第66-67页 |
| 1.1 植物材料 | 第66页 |
| 1.2 实验仪器 | 第66页 |
| 1.3 试剂 | 第66-67页 |
| 2.实验方法 | 第67-74页 |
| 2.1 光果甘草总RNA的提取 | 第67页 |
| 2.2 Illumina文库构建和测序 | 第67-68页 |
| 2.3 转录组数据生物信息学分析 | 第68-74页 |
| 3.实验结果 | 第74-122页 |
| 3.1 光果甘草样品总RNA的提取 | 第74-75页 |
| 3.2 光果甘草样品转录组数据生物信息学分析结果 | 第75-85页 |
| 3.3 L1-H1差异表达基因分析结果 | 第85-88页 |
| 3.4 L1-H2差异表达基因分析结果 | 第88-91页 |
| 3.5 L1-H3差异表达基因分析结果 | 第91-94页 |
| 3.6 核心差异表达基因分析结果 | 第94-99页 |
| 3.7 核心差异基因表达谱分析以及候选关键功能基因筛选结果 | 第99-122页 |
| 4.小结和讨论 | 第122-125页 |
| 第三章 光果甘草候选关键基因的qRT-PCR验证 | 第125-136页 |
| 1.实验材料 | 第125-126页 |
| 1.1 目标基因 | 第125页 |
| 1.2 实验仪器 | 第125-126页 |
| 1.3 试剂及耗材 | 第126页 |
| 2.实验方法 | 第126-130页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第126-127页 |
| 2.2 逆转录 | 第127-128页 |
| 2.3 荧光定量PCR扩增 | 第128-130页 |
| 2.4 qRT-PCR验证转录组测序结果 | 第130页 |
| 3 实验结果 | 第130-135页 |
| 3.1 候选关键功能基因的qRT-PCR分析结果 | 第130-132页 |
| 3.2 候选关键功能基因的qRT-PCR和RNA-Seq相关性分析结果 | 第132-135页 |
| 4 小结与讨论 | 第135-136页 |
| 第四章 光果甘草GgARPI基因的克隆和生物信息学分析 | 第136-148页 |
| 1.实验材料 | 第136-137页 |
| 1.1 植物材料 | 第136页 |
| 1.2 试剂 | 第136页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第136-137页 |
| 2.实验方法 | 第137-139页 |
| 2.1 光果甘草总RNA的提取和逆转录 | 第137页 |
| 2.2 GgARPI基因cDNA的PCR扩增 | 第137页 |
| 2.3 目的片段的T连接与转化 | 第137-138页 |
| 2.4 阳性克隆筛选及菌液冻存 | 第138-139页 |
| 2.5 生物信息学分析 | 第139页 |
| 3.实验结果 | 第139-146页 |
| 3.1 光果甘草总RNA提取结果 | 第139-140页 |
| 3.2 GgARPI基因PCR扩增结果 | 第140页 |
| 3.3 阳性克隆筛选结果 | 第140-141页 |
| 3.4 生物信息学分析结果 | 第141-146页 |
| 4.小结与讨论 | 第146-148页 |
| 第五章 光果甘草GgUGE基因的克隆和生物信息学分析 | 第148-157页 |
| 1.实验材料 | 第148页 |
| 1.1 植物材料、试剂、仪器和耗材 | 第148页 |
| 2.实验方法 | 第148-149页 |
| 2.1 光果甘草总RNA的提取和逆转录 | 第148页 |
| 2.2 光果甘草UGE基因cDNA的PCR扩增 | 第148-149页 |
| 2.3 目的片段的T连接与转化 | 第149页 |
| 2.4 阳性克隆筛选及菌液冻存 | 第149页 |
| 2.5 生物信息学分析 | 第149页 |
| 3.实验结果 | 第149-155页 |
| 3.1 光果甘草总RNA提取结果 | 第149页 |
| 3.2 目的基因PCR扩增结果 | 第149-150页 |
| 3.3 阳性克隆筛选结果 | 第150页 |
| 3.4 生物信息学分析结果 | 第150-155页 |
| 4.小结与讨论 | 第155-157页 |
| 第六章 光果甘草GgARPI、GgUGE基因植物双元表达载体的构建 | 第157-169页 |
| 1.实验材料 | 第157页 |
| 1.1 菌体及质粒 | 第157页 |
| 1.2 试剂 | 第157页 |
| 1.3 仪器和耗材 | 第157页 |
| 2.实验方法 | 第157-163页 |
| 2.1 含GgARPI和GgUGE基因大肠杆菌工程菌的活化及重组T质粒的提取 | 第157-158页 |
| 2.2 表达载体pCAMBIA1305.1酶切位点的分析 | 第158页 |
| 2.3 引物设计 | 第158-160页 |
| 2.4 带酶切位点的基因片段PCR扩增 | 第160页 |
| 2.5 PCR产物回收纯化 | 第160-161页 |
| 2.6 空载体的双酶切 | 第161页 |
| 2.7 目的基因片段与空载体双酶切产物的连接 | 第161-162页 |
| 2.8 重组质粒的转化 | 第162-163页 |
| 2.9 阳性克隆的筛选及测序 | 第163页 |
| 3.实验结果 | 第163-168页 |
| 3.1 含GgARPI和GgUGE基因的重组T质粒提取结果 | 第163-164页 |
| 3.2 GgARPI和GgUGE基因扩增结果 | 第164页 |
| 3.3 pCAMBIA1305.1载体质粒提取结果 | 第164-165页 |
| 3.4 pCAMBIA1305.1载体双酶切结果 | 第165页 |
| 3.5 菌液PCR验证结果 | 第165-166页 |
| 3.6 测序结果 | 第166-168页 |
| 4.小结与讨论 | 第168-169页 |
| 第七章 总结与展望 | 第169-173页 |
| 1.总结 | 第169-171页 |
| 2.展望 | 第171-173页 |
| 参考文献 | 第173-181页 |
| 致谢 | 第181-182页 |
| 在学期间主要研究成果 | 第182页 |
