| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 中枢神经系统炎症 | 第12-18页 |
| 1.1.1 中枢神经系统炎症的发生 | 第12-13页 |
| 1.1.2 中枢神经系统炎症的双向性 | 第13页 |
| 1.1.3 中枢神经系统疾病与神经炎症的关系 | 第13-17页 |
| 1.1.4 抗中枢神经炎症药物的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 α-MSH的神经保护作用 | 第18-23页 |
| 1.2.1 α-MSH受体在脑细胞上的分布 | 第18-19页 |
| 1.2.2 α-MSH抑制核转录因子NF-кB在脑细胞中的激活 | 第19-20页 |
| 1.2.3 α-MSH抑制CNS炎症反应 | 第20-21页 |
| 1.2.4 α-MSH对神经细胞的营养和保护作用 | 第21页 |
| 1.2.5 α-MSH与神经退行性疾病 | 第21-22页 |
| 1.2.6 α-MSH作为中枢神经炎症相关疾病候选药物存在的不足 | 第22-23页 |
| 1.3 长效药物蛋白载体HSA | 第23-25页 |
| 1.3.1 HSA简介 | 第23-24页 |
| 1.3.2 HSA的长效机制 | 第24-25页 |
| 1.3.3 HSA融合蛋白在长效药物开发中的应用 | 第25页 |
| 1.4 脑组织药物递送 | 第25-26页 |
| 1.4.1 脑组织药物递送的传统方式及存在的不足 | 第25-26页 |
| 1.4.2 蛋白转导结构域介导的非侵入性脑组织药物递送 | 第26页 |
| 1.5 课题的提出 | 第26-28页 |
| 第二章 TAT-HSA-α-MSH毕赤酵母重组表达菌株的构建 | 第28-59页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 材料 | 第29-35页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第29页 |
| 2.2.2 试剂及仪器 | 第29-35页 |
| 2.3 方法 | 第35-47页 |
| 2.3.1 含有L1的融合蛋白表达载体pPinkα-TAT-HSA-L1-α-MSH构建 | 第35-40页 |
| 2.3.2 含有L2的融合蛋白表达载体pPinkα-TAT-HSA-L2-α-MSH构建 | 第40-43页 |
| 2.3.3 融合蛋白诱导表达相关方法 | 第43-46页 |
| 2.3.4 TAT-HSA-L1-α-MSH融合蛋白纯化步骤 | 第46-47页 |
| 2.4 结果 | 第47-57页 |
| 2.4.1 pPinkα-TAT-HSA-L1-α-MSH表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 2.4.2 pPinkα-TAT-HSA-L2-α-MSH表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 2.4.3 融合蛋白TAT-HSA-L1-α-MSH的转化及高产菌株的筛选 | 第51-53页 |
| 2.4.4 融合蛋白TAT-HSA-L2-α-MSH的转化及高产菌株的筛选 | 第53-54页 |
| 2.4.5 融合蛋白TAT-HSA-L1-α-MSH及TAT-HSA-L2-α-MSH的WB验证 | 第54-55页 |
| 2.4.6 融合蛋白TAT-HSA-L1-α-MSH摇瓶表达产物的纯化 | 第55-56页 |
| 2.4.7 融合蛋白TAT-HSA-L1-α-MSH的ADAMTS-4酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 2.5 讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 TAT-HSA-α-MSH酵母重组菌株的发酵及产物纯化 | 第59-76页 |
| 3.1 前言 | 第59-60页 |
| 3.2 材料 | 第60-63页 |
| 3.2.1 菌株 | 第60页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第60-63页 |
| 3.3 方法 | 第63-64页 |
| 3.3.1 PichiaPink毕赤酵母融合蛋白高表达菌株发酵方法 | 第63页 |
| 3.3.2 TAT-HSA-α-MSH融合蛋白发酵液纯化方法 | 第63-64页 |
| 3.3.3 TAT-HSA-α-MSH融合蛋白结构确证相关方法 | 第64页 |
| 3.4 结果 | 第64-75页 |
| 3.4.1 PichiaPink毕赤酵母TAT-HSA-α-MSH融合蛋白高表达重组菌株发酵结果 | 第64-67页 |
| 3.4.2 TAT-HSA-α-MSH融合蛋白发酵液纯化结果 | 第67-69页 |
| 3.4.3 TAT-HSA-α-MSH融合蛋白结构确证相关结果 | 第69-75页 |
| 3.5 讨论 | 第75-76页 |
| 第四章 TAT-HSA-α-MSH融合蛋白抑制A172中NF-кB转录激活的研究 | 第76-99页 |
| 4.1 前言 | 第76-77页 |
| 4.2 材料 | 第77-78页 |
| 4.2.1 细胞与载体 | 第77页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第77-78页 |
| 4.3 方法 | 第78-86页 |
| 4.3.1 红色荧光蛋白载体pSV40-mCherry的构建方法 | 第78-80页 |
| 4.3.2 绿色荧光蛋白载体pNF-κB-TurboGFP的构建方法 | 第80-85页 |
| 4.3.3 细胞转染相关质粒大量提取步骤 | 第85页 |
| 4.3.4 A172细胞的培养 | 第85-86页 |
| 4.3.5 双荧光蛋白活性检测方法 | 第86页 |
| 4.3.6 双荧光素酶活性检测方法 | 第86页 |
| 4.4 结果 | 第86-97页 |
| 4.4.1 pSV40-mCherry载体构建及鉴定 | 第86-88页 |
| 4.4.2 pNF-κB-TurboGFP载体构建及鉴定 | 第88-90页 |
| 4.4.3 双荧光蛋白活性检测系统的建立 | 第90-91页 |
| 4.4.4 双荧光素酶活性检测系统的建立 | 第91-96页 |
| 4.4.5 TAT-HSA-α-MSH体外活性检测结果 | 第96-97页 |
| 4.5 讨论 | 第97-99页 |
| 第五章 TAT-HSA-α-MSH融合蛋白体内药效学研究 | 第99-109页 |
| 5.1 前言 | 第99页 |
| 5.2 材料 | 第99-100页 |
| 5.2.1 动物 | 第99页 |
| 5.2.2 试剂与仪器 | 第99-100页 |
| 5.3 方法 | 第100-102页 |
| 5.3.1 ELISA检测脑组织中的融合蛋白 | 第100页 |
| 5.3.2 免疫组化检测融合蛋白在脑组织中的分布 | 第100-101页 |
| 5.3.3 LPS腹腔注射脑组织炎症模型的建立及给药 | 第101页 |
| 5.3.4 LPS侧脑室注射脑组织炎症模型的建立及给药 | 第101-102页 |
| 5.3.5 脑组织匀浆中TNF-α的检测 | 第102页 |
| 5.3.6 ELISA法检测融合蛋白在小鼠体内的半衰期 | 第102页 |
| 5.3.7 ELISA法定量检测海马组织中融合蛋白的浓度 | 第102页 |
| 5.4 结果 | 第102-108页 |
| 5.4.1 融合蛋白TAT-HSA-α-MSH能有效跨越BBB | 第102-105页 |
| 5.4.2 融合蛋白TAT-HSA-α-MSH在小鼠体内的半衰期及相关药代动力学参数 | 第105-106页 |
| 5.4.3 融合蛋白TAT-HSA-α-MSH在小鼠海马组织中的定量分析结果 | 第106页 |
| 5.4.4 融合蛋白TAT-HSA-α-MSH在两种脑组织炎症中抑制前炎性因子TNF-α水平的升高 | 第106-108页 |
| 5.5 讨论 | 第108-109页 |
| 第六章 总结与展望 | 第109-111页 |
| 6.1 总结 | 第109-110页 |
| 6.2 展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-126页 |
| 在学期间研究成果 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
