| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表(Abbrevions) | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-36页 |
| 1.1 X染色体失活 | 第12-25页 |
| 1.1.1 X染色体失活现象概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 X染色体失活中心 | 第13-14页 |
| 1.1.3 X染色体失活的发生过程 | 第14-16页 |
| 1.1.4 Xist | 第16-17页 |
| 1.1.5 X染色体失活的调控 | 第17-21页 |
| 1.1.6 X染色体连锁基因 | 第21页 |
| 1.1.7 X染色体失活与疾病 | 第21-22页 |
| 1.1.8 X染色体失活与多能性因子的调节 | 第22-23页 |
| 1.1.9 失活X染色体的活化 | 第23-25页 |
| 1.2 不同物种X染色体失活模式 | 第25-27页 |
| 1.2.1 兔子X染色体失活 | 第25页 |
| 1.2.2 人X染色体失活 | 第25-26页 |
| 1.2.3 牛X染色体失活 | 第26页 |
| 1.2.4 马和驴X染色体失活 | 第26-27页 |
| 1.2.5 大鼠X染色体失活 | 第27页 |
| 1.2.6 猪X染色体失活 | 第27页 |
| 1.2.7 猴子X染色体失活 | 第27页 |
| 1.3 X染色体失活与动物克隆 | 第27-31页 |
| 1.3.1 动物克隆概述 | 第27-28页 |
| 1.3.2 动物克隆与表观修饰 | 第28-30页 |
| 1.3.3 克隆动物的X染色体失活规律 | 第30-31页 |
| 1.4 X染色体失活与ES/iPS细胞多能性 | 第31-34页 |
| 1.4.1 胚胎干细胞 | 第31页 |
| 1.4.2 诱导多能干细胞 | 第31-32页 |
| 1.4.3 ES/IPS细胞的X染色体失活状态 | 第32-33页 |
| 1.4.4 iPS细胞中X染色体的表观重编程 | 第33-34页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第36页 |
| 2.1.1 菌株 | 第36页 |
| 2.1.2 细胞系与实验动物 | 第36页 |
| 2.2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.3 实验试剂 | 第37-43页 |
| 2.3.1 分子生物学实验试剂与溶液配置 | 第37-39页 |
| 2.3.2 细胞生物学实验试剂与配置 | 第39-40页 |
| 2.3.3 胚胎操作常用试剂及配置 | 第40-43页 |
| 2.4 常用分析软件及网站 | 第43-44页 |
| 2.5 实验方法 | 第44-64页 |
| 2.5.1 感受态细胞制备及连接转化 | 第44-45页 |
| 2.5.2 质粒DNA提取 | 第45-46页 |
| 2.5.3 组织样及细胞DNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.5.4 PCR | 第47-49页 |
| 2.5.5 PCR及酶切产物回收 | 第49-50页 |
| 2.5.6 总RNA提取及反转录 | 第50-51页 |
| 2.5.7 定量PCR(qPCR) | 第51-52页 |
| 2.5.8 DNA甲基化检测 | 第52-54页 |
| 2.5.9 5'RACE (5' RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends, Version 2.0) | 第54-56页 |
| 2.5.10 3'RACE | 第56-58页 |
| 2.5.11 细胞复苏、传代与冻存 | 第58-59页 |
| 2.5.12 细胞电转染 | 第59页 |
| 2.5.13 单细胞克隆的挑取 | 第59-60页 |
| 2.5.14 猪iPS细胞的诱导、传代及单克隆挑取 | 第60页 |
| 2.5.15 细胞和胚胎免疫荧光染色 | 第60-61页 |
| 2.5.16 猪体外胚胎的制备 | 第61-64页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第64-90页 |
| 3.1 猪XIST基因全长获得及分析 | 第64-71页 |
| 3.1.1 猪XIST基因全长预测 | 第64页 |
| 3.1.2 猪XIST剪接位点的获得 | 第64-66页 |
| 3.1.3 通过5'RACE和3'RACE确定猪XIST转录起始位点和转录终止位点 | 第66-68页 |
| 3.1.4 猪XIST RNA序列的分析 | 第68页 |
| 3.1.5 XIST差异甲基化区域 | 第68-69页 |
| 3.1.6 猪XIST SNP/indel的预测和验证 | 第69-71页 |
| 3.2 猪早期胚胎中XIST的表达规律 | 第71-74页 |
| 3.2.1 猪早期胚胎XIST的表达 | 第71-73页 |
| 3.2.2 猪配子中XIST甲基化 | 第73页 |
| 3.2.3 猪孤雌胚胎中XIST甲基化 | 第73-74页 |
| 3.3 猪胎盘中XCI规律 | 第74-81页 |
| 3.3.1 胎盘中XIST的表达情况 | 第74-75页 |
| 3.3.2 猪胎盘中X连锁基因的表达规律 | 第75-81页 |
| 3.4 猪体细胞核移植胚胎中XCI规律 | 第81-86页 |
| 3.4.1 利用H3K27me3免疫荧光染色分析猪SCNT胚胎中XCI规律 | 第81-83页 |
| 3.4.2 猪雌性SCNT胚胎中不肉中刺Xi数目的细胞比例统计 | 第83-84页 |
| 3.4.3 猪雄性SCNT胚胎、体外受精胚胎和孤雌胚胎中H3K27me3免疫荧光染色 | 第84-86页 |
| 3.4.4 猪胚胎SCNT中XIST甲基化分析 | 第86页 |
| 3.5 猪iPS细胞中XIST表达和XCI状态 | 第86-90页 |
| 3.5.1 利用H3K27me3免疫荧光染色分析iPS细胞中XIST表达和XCI状态 | 第87-88页 |
| 3.5.2 qPCR和XIST甲基化分析iPS细胞中XIST表达和XCI状态 | 第88页 |
| 3.5.3 猪iPS细胞中多能性因子与XIST表达的关系 | 第88-90页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第90-93页 |
| 第五章 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附录 | 第104-119页 |
| 个人简历 | 第119页 |
