| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 木质纤维素类生物质资源应用现状及前景 | 第10-13页 |
| 1.1.1 木质纤维素燃料乙醇的生产及其重大意义 | 第10-11页 |
| 1.1.2 传统酿酒酵母做为乙醇生产菌种的优势 | 第11-13页 |
| 1.1.3 国内外有关燃料乙醇的研究进展 | 第13页 |
| 1.2 酵母菌工业育种的主要手段 | 第13-15页 |
| 1.2.1 诱变育种及自然育种 | 第14页 |
| 1.2.2 基因工程育种 | 第14页 |
| 1.2.3 原生质体融合育种 | 第14-15页 |
| 1.3 酵母融合菌株的筛选 | 第15-17页 |
| 1.4 分子生物学手段鉴定融合子 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题研究的目的及意义 | 第18页 |
| 1.5.1 本课题研究的目的 | 第18页 |
| 1.5.2 本课题研究的意义 | 第18页 |
| 1.6 本研究的主要技术路线 | 第18-20页 |
| 1.7 课题资助名称 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 供试菌株及质粒载体 | 第21页 |
| 2.1.2 PCR扩增引物 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要生物化学及分子生物学试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 主要生化试剂及缓冲液配制方法 | 第23-25页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第25-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-39页 |
| 2.2.1 原始菌株的活化及保藏 | 第27页 |
| 2.2.2 原始菌株生长曲线的测定 | 第27页 |
| 2.2.3 原生质体制备及再生 | 第27-28页 |
| 2.2.4 原生质体灭活 | 第28-29页 |
| 2.2.5 原生质体融合 | 第29-30页 |
| 2.2.6 融合子的筛选 | 第30页 |
| 2.2.7 菌落形态及细胞大小鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.8 基因表达水平验证 | 第31-33页 |
| 2.2.9 QT-PCR研究木糖各代谢基因转录表达情况 | 第33-34页 |
| 2.2.10 木糖代谢相关各基因酶活表达情况 | 第34-37页 |
| 2.2.11 乙醇检测方法和统计分析 | 第37页 |
| 2.2.12 双亲株及融合子木糖、葡萄糖单碳源发酵试验 | 第37-39页 |
| 第3章 结果与分析 | 第39-57页 |
| 3.1 原始菌株生长曲线的测定 | 第39-40页 |
| 3.2 出发菌株原生质体制备及再生结果 | 第40-43页 |
| 3.2.1 脱壁预处理时间对原生质制备率的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.2 酶解时间对原生质体制备率及再生率的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.3 蜗牛酶浓度对原生质体制备率及再生率的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 酿酒酵母TG、树干毕赤酵母原生质体灭活处理结果 | 第43-45页 |
| 3.3.1 酿酒酵母TG、树干毕赤酵母原生质体紫外线灭活处理结果 | 第43-44页 |
| 3.3.2 酿酒酵母TG、树干毕赤酵母原生质体热灭活处理结果 | 第44-45页 |
| 3.4 原生质体融合及融合子的检出结果 | 第45-49页 |
| 3.4.1 原生质体的灭活及融合 | 第45-46页 |
| 3.4.2 重组子的筛选 | 第46-49页 |
| 3.5 菌落形态及细胞大小鉴定 | 第49-50页 |
| 3.6 融合子TP11基因表达结果 | 第50-53页 |
| 3.6.1 融合子菌株基因组的提取结果 | 第50-51页 |
| 3.6.2 木糖代谢相关基因PCR扩增结果 | 第51-53页 |
| 3.7 蛋白酶活的测定 | 第53-57页 |
| 3.7.1 考马斯亮蓝测定总蛋白质浓度结果 | 第53-55页 |
| 3.7.2 木糖还原酶酶活力的测定结果 | 第55页 |
| 3.7.3 木糖醇脱氢酶酶活的测定结果 | 第55-56页 |
| 3.7.4 木酮糖激酶酶活的测定结果 | 第56-57页 |
| 第4章 结果讨论 | 第57-62页 |
| 4.1 酵母菌育种手段的选择 | 第57页 |
| 4.2 原生质体制备条件的摸索与确定 | 第57-58页 |
| 4.3 原生质体筛选方法的选择 | 第58-59页 |
| 4.4 酶活的测定 | 第59页 |
| 4.5 融合酵母菌株的木糖代谢性能评价与分析 | 第59-60页 |
| 4.6 工作展望 | 第60-62页 |
| 第5章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
