| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 RGD 配体与肿瘤血管新生 | 第10-17页 |
| 第二章 野生型rLj-RGD3及其突变体rLj-112、rLj-113、rLj-114、rLj-115、rLj-26、rLj-27蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第17-29页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 rLj-26、rLj-27突变体目的基因的合成 | 第17页 |
| 2.2.2 6种突变体目的基因质粒的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.3 6种突变体目的基因质粒的琼脂糖凝胶电泳 | 第18页 |
| 2.2.4 将重组的质粒转化至E.coliBL21表达菌中[40] | 第18-19页 |
| 2.2.5 阳性转化菌质粒的提取及基因测序检验 | 第19页 |
| 2.2.6 对新增2种克隆菌IPTG诱导前后目的蛋白表达的比较 | 第19-20页 |
| 2.2.7 rLj-RGD3及其6种突变体蛋白的表达及纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.8 纯化蛋白的Tricine-SDSPAGE[41]电泳 | 第21-22页 |
| 2.2.9 纯化蛋白浓度的测定——考马斯亮蓝G-250法[54] | 第22-23页 |
| 2.3 结果 | 第23-28页 |
| 2.3.1 野生型Lj-RGD3的蛋白序列比对分析,突变体rLj-26、rLj-27的cDNA序列合成及其推导的氨基酸序列 | 第23-25页 |
| 2.3.2 目的质粒的提取和鉴定以及目的基因表达菌的转化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 基因重组蛋白rLj-RGD3、rLj-112、rLj-113、rLj-114、rLj-115、rLj-26、rLj-27的纯化及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 绘制蛋白标准曲线及蛋白质浓度的测定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28页 |
| 2.5 结论 | 第28-29页 |
| 第三章 野生型rLj-RGD3及其突变体rLj-112、rLj-113、rLj-114、rLj-115、rLj-26、rLj-27对Lewis细胞生物活性及部分机制的研究 | 第29-48页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第29页 |
| 3.2 方法 | 第29-34页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第29页 |
| 3.2.2 rLj-RGD3及其突变体蛋白对Lewis细胞增殖的影响——MTT比色法 | 第29页 |
| 3.2.3 rLj-RGD3及其突变体蛋白对Lewis细胞迁移的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.4 rLj-RGD3及其突变体蛋白对Lewis细胞浸润的影响 | 第30-31页 |
| 3.2.5 rLj-RGD3及其突变体蛋白对Lewis细胞凋亡的影响 | 第31-32页 |
| 3.2.6 凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的表达 | 第32-34页 |
| 3.3 结果 | 第34-44页 |
| 3.3.1 rLj-RGD3及其6种突变体蛋白对由bFGF诱导的Lewis细胞增殖的影响 | 第34-36页 |
| 3.3.2 rLj-RGD3及其突变体蛋白对Lewis细胞迁移的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.3 rLj-RGD3及其突变体蛋白对Lewis细胞浸润的影响 | 第37-39页 |
| 3.3.4 rLj-RGD3及其6种突变体蛋白对Lewis细胞凋亡的影响 | 第39-44页 |
| 3.3.5 凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的表达 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-47页 |
| 3.5 结论 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 本论文的创新点 | 第49页 |
| 需要进一步研究的问题 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录A rLj-112/rLj-113、rLj-114/rLj-115/rLj-26/rLj-27重组质粒测序图 | 第54-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
