| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1 细胞分裂素的简介 | 第14-15页 |
| 1.1 细胞分裂素的类型 | 第14-15页 |
| 1.2 细胞分裂素的功能 | 第15页 |
| 2 细胞分裂素的代谢 | 第15-16页 |
| 2.1 细胞分裂素的合成 | 第15-16页 |
| 2.2 细胞分裂素的降解 | 第16页 |
| 3 细胞分裂素的信号转导 | 第16-17页 |
| 4 细胞分裂素的转运 | 第17-19页 |
| 4.1 ENT和PUP蛋白 | 第17-18页 |
| 4.2 ABC转运蛋白 | 第18-19页 |
| 4.3 AtABCG14转运蛋白 | 第19页 |
| 5 鉴定蛋白互作的方法 | 第19-22页 |
| 5.1 酵母双杂交技术 | 第20页 |
| 5.2 免疫共沉淀技术 | 第20-21页 |
| 5.3 双分子荧光互补技术 | 第21页 |
| 5.4 pull-down技术 | 第21页 |
| 5.5 噬菌体展示技术 | 第21-22页 |
| 6 本研究的目的及科学意义 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-52页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 植物材料 | 第23页 |
| 1.2 实验菌种 | 第23页 |
| 1.3 实验载体 | 第23页 |
| 1.4 实验试剂与仪器 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-52页 |
| 2.1 拟南芥的培养与种植 | 第24-25页 |
| 2.2 烟草的种植 | 第25页 |
| 2.3 免疫共沉淀 | 第25-29页 |
| 2.3.1 拟南芥膜蛋白的提取 | 第25页 |
| 2.3.2 膜蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第26-28页 |
| 2.3.4 转膜 | 第28页 |
| 2.3.5 Western blotting | 第28页 |
| 2.3.6 LC-MS/MS分析 | 第28-29页 |
| 2.4 SLIC方法构建nLUC载体 | 第29-37页 |
| 2.4.1 候选基因的克隆 | 第29-32页 |
| 2.4.2 nLUC载体的酶切 | 第32页 |
| 2.4.3 候选基因及载体的回收 | 第32-33页 |
| 2.4.4 载体的连接及DH5α转化 | 第33-34页 |
| 2.4.5 菌落PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.6 质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.4.7 酶切验证及菌液保存 | 第36页 |
| 2.4.8 农杆菌的热激转化 | 第36-37页 |
| 2.4.9 农杆菌菌液PCR验证 | 第37页 |
| 2.5 烟草瞬时表达技术 | 第37-38页 |
| 2.6 酵母中验证基因互作的方法 | 第38-41页 |
| 2.6.1 酵母表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.6.2 酵母的热激转化 | 第39-40页 |
| 2.6.3 酵母中基因互作的验证 | 第40-41页 |
| 2.7 Gateway方法构建载体 | 第41-43页 |
| 2.7.1 载体的连接 | 第41-42页 |
| 2.7.2 大肠杆菌的热激转化及验证 | 第42-43页 |
| 2.8 农杆菌介导的拟南芥花侵染法转基因及其筛选方法 | 第43-44页 |
| 2.8.1 花侵染法转基因 | 第43-44页 |
| 2.8.2 转基因苗的筛选 | 第44页 |
| 2.9 CTAB法提取拟南芥DNA | 第44-45页 |
| 2.10 T-DNA插入突变体纯合体的鉴定 | 第45-47页 |
| 2.11 Trizon法提取拟南芥RNA | 第47-48页 |
| 2.12 拟南芥cDNA的合成 | 第48页 |
| 2.13 荧光定量PCR分析 | 第48-49页 |
| 2.14 6-BA处理拟南芥的方法 | 第49-50页 |
| 2.15 GUS染色 | 第50-52页 |
| 2.15.1 GUS染液的配制 | 第50-51页 |
| 2.15.2 拟南芥的GUS染色 | 第51-52页 |
| 第三章 结果与分析 | 第52-70页 |
| 1 细胞分裂素转运蛋白AtABCG14候选互作蛋白的获得 | 第52-59页 |
| 1.1 Co-IP技术获得GFP-AtABCG14复合体 | 第52-53页 |
| 1.2 LC-MS/MS分析获得与AtABCG14互作的候选蛋白 | 第53-59页 |
| 2 候选蛋白与AtABCG14在烟草中的相互作用 | 第59-62页 |
| 2.1 候选基因载体的构建 | 第59-60页 |
| 2.2 候选蛋白与AtABCG14在烟草中的瞬时表达 | 第60-62页 |
| 3 候选基因T-DNA插入突变体的表型统计 | 第62-67页 |
| 3.1 候选基因T-DNA插入突变体的鉴定 | 第62-64页 |
| 3.2 候选基因T-DNA插入突变体的表型分析 | 第64-67页 |
| 3.3 aha1和abcg36突变体对6-BA的响应 | 第67页 |
| 4 候选蛋白与AtABCG14在酵母中的相互作用 | 第67-68页 |
| 5 细胞分裂素响应基因ARR5在aha1、abcg36突变体的相对表达 | 第68-70页 |
| 讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-85页 |
| 附录 | 第85-88页 |
| 1 常用抗生素及试剂母液配制方法 | 第85-86页 |
| 2 实验室常用培养基的配制 | 第86-88页 |
| 2.1 LB培养基的配制 | 第86页 |
| 2.2 1/2 MS培养基的配制 | 第86-87页 |
| 2.3 YPD培养基的配制 | 第87页 |
| 2.4 SD培养基的配制 | 第87-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
