| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1. 引言 | 第7-12页 |
| ·脂氢过氧化物裂解酶的研究进展 | 第7-11页 |
| ·脂氢过氧化物裂解酶简介 | 第7页 |
| ·催化机制 | 第7-8页 |
| ·酶学性质 | 第8-9页 |
| ·二级结构 | 第9页 |
| ·HPL 的亚细胞定位 | 第9页 |
| ·HPL 的分子生物学研究进展 | 第9-10页 |
| ·HPL 催化产物的生理功能 | 第10页 |
| ·HPL 固定化的研究进展 | 第10-11页 |
| ·本课题的立题依据和意义 | 第11页 |
| ·本课题的研究内容 | 第11-12页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第12-20页 |
| ·材料与设备 | 第12-14页 |
| ·供试植物材料 | 第12页 |
| ·菌株与质粒 | 第12页 |
| ·实验主要试剂 | 第12-13页 |
| ·主要实验仪器 | 第13页 |
| ·培养基及试剂配制及灭菌方法 | 第13-14页 |
| ·实验方法 | 第14-20页 |
| ·马铃薯叶片中总RNA 的提取 | 第14页 |
| ·引物的设计 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR | 第15页 |
| ·重组质粒pMD-stHPL 的构建 | 第15-17页 |
| ·重组质粒pET-C-stHPL 及pQE-N-stHPL 的构建 | 第17页 |
| ·基因工程菌 E. coli BL21(DE3)/pET-C-stHPL 及 E. coli M15/pQE-N-stHPL 的构建 | 第17页 |
| ·重组脂氢过氧化物裂解酶的诱导表达 | 第17-18页 |
| ·重组HPL 的分离纯化 | 第18页 |
| ·重组HPL 的活性检测及挥发性产物鉴定 | 第18-19页 |
| ·重组HPL 的酶学性质研究 | 第19页 |
| ·苋菜HPL 的固定化 | 第19-20页 |
| ·苋菜HPL 固定化条件的确定 | 第20页 |
| ·固定化苋菜HPL 的酶学性质 | 第20页 |
| 3. 结果与讨论 | 第20-38页 |
| ·马铃薯幼叶中总RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·cDNA 的RT-PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第22-23页 |
| ·HPL 基因测序分析 | 第23-24页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第24-27页 |
| ·基因工程菌E. coli BL21(DE3)/pET-C-stHPL 的构建 | 第24-26页 |
| ·基因工程菌E. coli M15/pQE-N-stHPL 的构建 | 第26-27页 |
| ·基因工程菌的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·重组HPL 的纯化 | 第28-29页 |
| ·重组HPL 活性测定及挥发性产物鉴定 | 第29-31页 |
| ·重组HPL 的酶学性质 | 第31-34页 |
| ·pH 对重组HPL 酶活及酶活稳定性的影响 | 第31页 |
| ·温度对重组HPL 酶活及酶活稳定性的影响 | 第31-32页 |
| ·Triton X-100 对酶活的影响 | 第32页 |
| ·盐离子对酶活的影响 | 第32-33页 |
| ·酶反应动力学常数Km 及Vmax | 第33-34页 |
| ·苋菜HPL 固定化条件的确定 | 第34-36页 |
| ·海藻酸钠和明胶浓度对固定化的影响 | 第34页 |
| ·CaC1_2 浓度对固定化的影响 | 第34-35页 |
| ·戊二醛浓度对固定化的影响 | 第35-36页 |
| ·戊二醛交联时间对固定化的影响 | 第36页 |
| ·固定化苋菜HPL 的酶学性质 | 第36-38页 |
| ·pH 对固定化HPL 酶活及酶活稳定性的影响 | 第36-37页 |
| ·温度对固定化HPL 酶活及酶活稳定性的影响 | 第37页 |
| ·固定化HPL 的操作稳定性 | 第37-38页 |
| ·固定化HPL 的贮藏稳定性 | 第38页 |
| 4. 主要结论 | 第38-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
