| 摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 贾第虫概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 贾第虫与贾第虫病 | 第12页 |
| 1.1.2 贾第虫分类及生活史 | 第12-13页 |
| 1.1.3 贾第虫的致病机理 | 第13-14页 |
| 1.2 贾第虫研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 贾第虫基因组与比较基因组学 | 第14页 |
| 1.2.2 贾第虫转染体系 | 第14页 |
| 1.2.3 贾第虫内源启动子 | 第14-15页 |
| 1.3 CRISPR-CAS9基因编辑简介 | 第15-17页 |
| 1.3.1 真核生物基因编辑发展史 | 第15页 |
| 1.3.2 CAS9蛋白与CRISPR-CAS9基因编辑 | 第15-16页 |
| 1.3.3 CRISPR-CAS9基因编辑技术的优势 | 第16-17页 |
| 1.4 CRISPR-CAS9基因编辑技术在原虫上的应用 | 第17-18页 |
| 1.4.1 CRISPR-CAS9在弓形虫中的应用 | 第17页 |
| 1.4.2 CRISPR-CAS9在克氏锥虫中的应用 | 第17页 |
| 1.4.3 CRISPR-CAS9在隐孢子虫中的应用 | 第17-18页 |
| 1.4.4 CRISPR-CAS9在疟原虫中的应用 | 第18页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验虫种 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要实验数据分析软件 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-35页 |
| 2.2.1 贾第虫CAS9真核转染载体的生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.2.2 贾第虫内源启动子的选择 | 第21页 |
| 2.2.3 贾第虫CAS9真核转染载体的构建策略 | 第21-23页 |
| 2.2.4 引物设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.2.5 贾第虫基因组提取 | 第24页 |
| 2.2.6 目的基因的克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.7 分步法构建贾第虫CAS9真核转染载体 | 第27-29页 |
| 2.2.8 贾第虫CAS9载体的真核表达 | 第29-35页 |
| 3 结果 | 第35-45页 |
| 3.1 贾第虫启动子分析结果 | 第35页 |
| 3.2 启动子基因克隆结果 | 第35-38页 |
| 3.2.1 贾第虫启动子扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.2 启动子重组克隆质粒鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 3’端UTR扩增 | 第37页 |
| 3.2.4 3’端UTR克隆质粒鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 启动子基因表达载体构建结果 | 第38-41页 |
| 3.3.1 启动子基因连接pBluescript载体结果 | 第38页 |
| 3.3.2 CAS9基因扩增 | 第38-39页 |
| 3.3.3 贾第虫pGDH::CAS9::TUB真核转染载体验证 | 第39-40页 |
| 3.3.4 贾第虫启动子替换载体验证 | 第40-41页 |
| 3.4 CAS9蛋白在贾第虫滋养体内的表达鉴定 | 第41-43页 |
| 3.4.1 荧光显微镜观察鉴定 | 第41-43页 |
| 3.4.2 Westernblot分析 | 第43页 |
| 3.5 转染不同时期CAS9mRNA表达水平评价 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 贾第虫内源启动子的生物信息学分析 | 第45页 |
| 4.2 贾第虫CAS9真核转染载体构建策略的相关分析 | 第45-46页 |
| 4.3 CAS9蛋白在贾第虫滋养体内的表达 | 第46页 |
| 4.4 贾第虫CRISPR-CAS9基因编辑系统分析 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
