| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-16页 |
| 一、引言 | 第16-30页 |
| ·植物细胞壁的研究进展 | 第17-20页 |
| ·纤维素 | 第18页 |
| ·半纤维素 | 第18-19页 |
| ·果胶 | 第19页 |
| ·木质素 | 第19-20页 |
| ·细胞壁蛋白 | 第20页 |
| ·阿拉伯半乳聚糖蛋白(AGP)的研究进展 | 第20-24页 |
| ·阿拉伯半乳聚糖蛋白(AGP)的结构 | 第20-22页 |
| ·AGP的表达、定位及分布 | 第22页 |
| ·AGP的生物合成 | 第22页 |
| ·AGP生物学功能的研究 | 第22-24页 |
| ·糖基转移酶的研究进展 | 第24-27页 |
| ·糖基转移酶基因的发现与鉴定 | 第24-25页 |
| ·糖基转移酶的分类 | 第25页 |
| ·糖基转移酶的结构特征 | 第25-26页 |
| ·糖基转移酶的生物学功能及应用前景 | 第26-27页 |
| ·参与AGP合成的糖基转移酶的研究进展 | 第27-28页 |
| ·立题依据及研究意义 | 第28-30页 |
| 二、实验材料 | 第30-36页 |
| ·菌种、载体和文库 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·化学试剂 | 第30页 |
| ·工具酶 | 第30页 |
| ·常用储液 | 第30-31页 |
| ·常用缓冲液及提取buffer的配制 | 第31-32页 |
| ·常用培养基 | 第32-35页 |
| ·PCR分析扩增试剂及DNA测序 | 第35页 |
| ·所用仪器设备 | 第35-36页 |
| 三、实验方法 | 第36-53页 |
| ·棉花GhGalT1基因的分离鉴定与序列分析 | 第36页 |
| ·棉花GhGalT1基因的表达分析 | 第36-39页 |
| ·棉花不同组织材料的收取 | 第36页 |
| ·实验器材及试剂的处理 | 第36-37页 |
| ·用改良的CTAB法提取棉花不同组织的总RNA | 第37页 |
| ·RNA消化、纯化及逆转录反应 | 第37页 |
| ·PCR检测逆转录的cDNA完整性 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR分析基因的表达模式 | 第38-39页 |
| ·GhGalT1基因的启动子的分析 | 第39-42页 |
| ·棉花基因组gDNA的提取 | 第39页 |
| ·启动子的分离 | 第39页 |
| ·启动子测序与序列分析 | 第39-40页 |
| ·GhGalT1 promoter::GUS融合表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·GhGalT1 promoter::GUS转基因拟南芥的筛选、鉴定及GUS染色 | 第41-42页 |
| ·GhGalT1蛋白的亚细胞定位分析 | 第42-43页 |
| ·GhGalT1-eGFP融合表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·GhGalT1-eGFP融合表达载体与高尔基体标记蛋白(GONST1-YFP)共转烟草叶表皮细胞 | 第43页 |
| ·GhGalT1过量表达转基因拟南芥、T-DNA突变体功能的研究 | 第43-48页 |
| ·GhGalT1过量表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·GhGalT1过量表达转基因拟南芥的筛选、鉴定与表达分析 | 第44页 |
| ·与GhGalT1同源的拟南芥T-DNA突变体的鉴定及双突变体的获得 | 第44-45页 |
| ·GhGalT1过量表达转基因拟南芥、T-DNA突变体植株的表型分析 | 第45页 |
| ·叶绿素含量及光合作用效率的测定 | 第45-46页 |
| ·细胞壁组分分析(糖的衍生化-GC分析) | 第46-48页 |
| ·细胞壁发育相关基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第48页 |
| ·GhGalT1::HA过量表达及RNAi载体的棉花遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第48-49页 |
| ·GhGalT1:HA过量表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·GhGalT1 RNAi抑制型表达载体的构建 | 第49页 |
| ·农杆菌介导的棉花遗传转化 | 第49页 |
| ·转基因阳性植株的鉴定 | 第49页 |
| ·酵母双杂交实验筛选与GhGalT1相互作用的蛋白 | 第49-51页 |
| ·酿酒酵母pGBKT7-GhGalT1表达载体的构建 | 第50页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备及酵母转化 | 第50页 |
| ·pGBKT7-GhGalT1融合蛋白的自激活及毒性检测 | 第50页 |
| ·酵母mating实验 | 第50页 |
| ·mating效率的计算 | 第50页 |
| ·统计与分析筛库结果 | 第50-51页 |
| ·利用回转实验初步验证相互作用 | 第51页 |
| ·酵母中相互作用检测 | 第51页 |
| ·Pichia pastoris中表达GhGalT1蛋白 | 第51-53页 |
| ·毕氏酵母表达载体pPIZCA-GhGalT1的构建与线性化 | 第51页 |
| ·毕氏酵母X-33感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·毕氏酵母X-33的电转化及检测 | 第52页 |
| ·重组酵母的诱导表达及检测 | 第52-53页 |
| 四、实验结果 | 第53-81页 |
| ·棉花GhGalT1基因的分离鉴定与序列分析 | 第53-56页 |
| ·棉花GhGalT1基因的鉴定与蛋白结构分析 | 第53页 |
| ·同源性分析 | 第53-55页 |
| ·GhGa1T1的系统进化分析 | 第55-56页 |
| ·棉花GhGalT1基因的表达分析 | 第56页 |
| ·GhGalT1基因的启动子分析 | 第56-60页 |
| ·GhGalT1基因的启动子的分离与序列分析 | 第56-57页 |
| ·GhGalT1promoter::GUS融合表达载体的构建及转基因拟南芥鉴定 | 第57-58页 |
| ·GhGalT1基因启动子的表达模式分析 | 第58页 |
| ·GhGalT1基因启动子活性受盐、干旱和激素的诱导 | 第58-60页 |
| ·GhGalT1蛋白的亚细胞定位分析 | 第60-62页 |
| ·GhGalTl-eGFP融合表达载体的构建及电转化农杆菌 | 第60-61页 |
| ·GhGalTl-eGFP融合蛋白与高尔基体标记蛋白(GONST1-YFP)共转烟草叶表皮细胞的荧光定位观察 | 第61-62页 |
| ·GhGalT1过量表达转基因拟南芥、T-DNA突变体的功能研究 | 第62-72页 |
| ·GhGalT1过量表达载体的构建及拟南芥转化 | 第62页 |
| ·GhGalT1过量表达转基因拟南芥的筛选、鉴定与表达分析 | 第62-64页 |
| ·与棉花GhGalT1同源的拟南芥T-DNA突变体的鉴定分析 | 第64-66页 |
| ·GhGalT1过量表达转基因拟南芥幼苗发育早期的表型分析 | 第66-69页 |
| ·GhGalT1过量表达增强了转基因拟南芥对阿拉伯糖和半乳糖的耐受性 | 第69-70页 |
| ·细胞壁单糖组分分析 | 第70-71页 |
| ·细胞壁发育相关基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第71-72页 |
| ·GhGalT1:HA过量表达载体导入棉花及转基因植株的鉴定 | 第72-74页 |
| ·GhGalT1:HA过量表达载体的构建及电转化农杆菌 | 第72页 |
| ·GhGalT1:HA过量表达载体导入棉花 | 第72-73页 |
| ·GhGalT1:HA过量表达转基因棉花的鉴定 | 第73-74页 |
| ·GhGal-RNAi载体导入棉花及转基因植株的鉴定 | 第74-76页 |
| ·GhGal-RNAi抑制型载体的构建及电转化农杆菌 | 第74-75页 |
| ·GhGalT1 RNAi抑制型载体导入棉花 | 第75-76页 |
| ·GhGalT1 RNAi转基因棉花的鉴定 | 第76页 |
| ·酵母双杂交实验筛选与GhGalT1相互作用的蛋白 | 第76-79页 |
| ·pGBKT7-GhGalT1表达载体的构建及酵母转化 | 第76-77页 |
| ·pGBKT7-GhGalT1融合蛋白的自激活及毒性检测 | 第77-78页 |
| ·酵母mating实验中合子的观察与mating效率的统计 | 第78页 |
| ·棉花10 DPA纤维cDNA文库的筛选 | 第78-79页 |
| ·毕氏酵母(Pichia pastoris)中表达GhGalT1蛋白 | 第79-81页 |
| ·pPIZCA-GhGalT1表达载体的构建与线性化 | 第79页 |
| ·SDS-PAGE胶检测GhGalT1蛋白的表达 | 第79-81页 |
| 五、讨论 | 第81-85页 |
| ·GhGalT1属于GT31家族成员 | 第81页 |
| ·GhGalT1基因启动子活性受盐、干旱和激素的诱导 | 第81-82页 |
| ·GhGalT1基因的功能可能与糖代谢相关 | 第82-83页 |
| ·GhGalT1过量表达增强了转基因拟南芥对阿拉伯糖和半乳糖的耐受性 | 第83-84页 |
| ·GhGalT1基因可能调控植物细胞壁中果胶的合成 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
