| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 第一章 树鼩腺病毒的分离鉴定 | 第17-32页 |
| 1. 材料与方法 | 第17-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第17页 |
| 1.1.2 细胞 | 第17页 |
| 1.1.3 病毒 | 第17页 |
| 1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 1.3 实验仪器 | 第18-19页 |
| 1.4 实验方法 | 第19-26页 |
| 1.4.1 感染症状 | 第19页 |
| 1.4.2 肺组织病理切片检测 | 第19-20页 |
| 1.4.3 树鼩原代肾细胞TKC分离培养 | 第20-22页 |
| 1.4.3.1 TKC分离 | 第20-21页 |
| 1.4.3.2 TKC传代培养 | 第21页 |
| 1.4.3.3 TKC鉴定 | 第21-22页 |
| 1.4.4 TKC分离病毒 | 第22页 |
| 1.4.5 病毒的增殖 | 第22页 |
| 1.4.6 病毒的超速离心浓缩 | 第22页 |
| 1.4.7 病毒感染细胞的电镜超薄切片 | 第22-23页 |
| 1.4.8 TCID50的测定 | 第23页 |
| 1.4.9 腺病毒抗原免疫荧光染色 | 第23页 |
| 1.4.10 病毒DNA提取 | 第23-24页 |
| 1.4.11 TAV普通PCR检测方法的建立 | 第24-26页 |
| 1.4.11.1 引物设计合成 | 第24-25页 |
| 1.4.11.2 PCR反应体系及反应条件优化 | 第25页 |
| 1.4.11.3 PCR产物序列测定 | 第25-26页 |
| 2. 实验结果 | 第26-30页 |
| 2.1 树鼩肺组织病理学病变特征观察 | 第26-27页 |
| 2.2 树鼩原代肾细胞TKC和CK18的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 TKC感染肺组织样品的细胞病变 | 第28-29页 |
| 2.4 TKC感染含病毒样品的细胞超薄切片 | 第29页 |
| 2.5 含病毒样品感染树鼩原代肾细胞免疫荧光检测 | 第29-30页 |
| 2.6 TAV普通PCR检测结果 | 第30页 |
| 3. 讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 树鼩腺病毒TAQMAN荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 | 第32-41页 |
| 1 材料与方法 | 第32-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.1.2 病毒 | 第32页 |
| 1.1.3 主要试剂及耗材 | 第32-33页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 1.2.1 树鼩腺病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 | 第33-36页 |
| 1.2.1.1 定量方法原理 | 第33页 |
| 1.2.1.2 TaqMan探针、引物设计合成 | 第33-34页 |
| 1.2.1.3 标准品的制备 | 第34页 |
| 1.2.1.4 TaqMan荧光定量PCR体系的确立 | 第34-35页 |
| 1.2.1.5 绘制标准曲线 | 第35页 |
| 1.2.1.6 灵敏性检测 | 第35页 |
| 1.2.1.7 重复性及特异性检测 | 第35-36页 |
| 1.2.1.8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的初步应用 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-39页 |
| 2.1 目的片段的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2 TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线 | 第37页 |
| 2.3 TaqMan实时荧光定量PCR灵敏性 | 第37-38页 |
| 2.4 TaqMan实时荧光定量PCR重复性 | 第38页 |
| 2.5 TaqMan实时荧光定量PCR特异性 | 第38-39页 |
| 2.6 TaqMan实时荧光定量PCR初步应用 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 树鼩腺病毒全基因组解析 | 第41-55页 |
| 1 材料与方法 | 第41-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第41页 |
| 1.1.1 病毒 | 第41页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第41页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第41页 |
| 1.2 方法 | 第41-49页 |
| 1.2.1 TAV-KM全基因组序列的测定 | 第41-45页 |
| 1.2.2 基于全基因组构建系统进化树 | 第45-48页 |
| 1.2.2.1 病毒基因组的基因预测 | 第45页 |
| 1.2.2.2 病毒间直系同源基因的搜寻 | 第45-47页 |
| 1.2.2.3 直系同源基因的比对 | 第47页 |
| 1.2.2.4 序列的修饰、串联及最佳核苷酸替换模型的选择 | 第47页 |
| 1.2.2.5 系统进化树的推断 | 第47-48页 |
| 1.2.2.6 系统进化树的构图 | 第48页 |
| 1.2.3 基于Fiber基因构建系统进化树 | 第48页 |
| 1.2.4 两株树鼩源腺病毒编码基因序列及氨基酸序列比对 | 第48页 |
| 1.2.5 两株树鼩源腺病毒纤毛蛋白氨基酸序列比对 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-52页 |
| 2.1 两株树鼩源腺病毒编码基因核苷酸及氨基酸序列比对结果 | 第49-50页 |
| 2.2 系统进化树分析结果 | 第50-52页 |
| 2.3 两株树鼩源腺病毒fiber基因氨基酸序列比对结果 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录一 英文缩略语表 | 第60-61页 |
| 附录二 主要细胞培养溶液配制 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 研究生简历 | 第63-64页 |
